转RyR2基因致SK2通道功能变化治疗老龄房颤犬的机制研究

摘要

目的:探讨转RyR2基因致SK2通道功能变化治疗老龄性房颤犬的机制。
　　方法:实验动物随机分组，假手术组（A组）7只，仅植入起搏电极，不行心房快速起搏。模型组植入起搏电极，行心房快速刺激8周后，将造模成功的房颤组随机分为两个亚组（B组和C组），每组7只。假手术组（A组）:经胸心包腔注射500μl生理盐水后仍不行心房快速起搏。AAV1/EGFP+房颤组（B组）:快速心房起搏8周后经胸心包腔内注射500μl携带EGFP（绿色荧光蛋白）基因的腺相关病毒溶液后继续行心房快速起搏14天。AAV1/RyR2-EGFP+房颤组（C组）:快速心房起搏8W周后经胸心包腔内注射500μl携带RyR2基因的腺相关病毒溶液后继续行心房快速起搏14天。持续快速左心耳起搏建立慢性房颤犬模型，测定两组心房和肺静脉各部位ERP变化和HE染色和电镜观察心肌组织病理组织和超微结构改变。然后采用免疫组化法，RT-PCR和Western blot检测RyR2和SK2基因和蛋白变化。
　　结果:1.手术成功并顺利完成实验。模型组10只犬经持续快速左心耳起搏8周，均出现典型的心房颤动心电图改变，ERP随着时间明显缩短。超微结构显示:肌溶解，肌小节的丧失常位于核周其内可见肌小节碎片。肌小节缺失处可见大小和形状发生典型改变的线粒体。线粒体变长。闰盘扭模糊和不连续。2.经胸心包腔注射AAV1/RyR2-EGFP基因转染后，左、右心房冰冻切片均显示大量绿色荧光蛋白表达，呈强阳性。免疫组化检测犬左心房RyR2和SK2表达显示:可见大量棕色颗粒表达。犬左心房RyR2和SK2mRNA和蛋白表达显示可见RyR2和SK2与β-actin基因和蛋白比较表达增强。
　　结论:1.建立RAP模型能模拟房颤发生早期的电生理改变，稳定可靠，重复性好。与临床房颤相似，具有结构和电生理功能的异常。2.腺病毒导RyR2使其在心肌细胞内过表达，活性增加，可致RyR2蛋白和SK2蛋白上调。

目录

声明

中英文缩略词对照表

摘要

前言

研究内容方法

1 实验材料

1．1 研究对象

1．2 实验动物分组

1．3 实验器械和仪器

1．4 实验药品和试剂

2 实验方法

2．1 持续快速心房起搏犬致房颤模型制作

2．2 心房及肺静脉各部位有效不应期的测量

2．3 标本采集和病理形态学观察

2．4 经胸心包腔注射AAV1／RyR2-EGFP基因转染

2．5 AAV1／RyR2-EGFP表达检测

2．6 免疫组化测定RyR2和SK2在右心房组织中的表达

2．7 提取心肌组织中的总RNA

2．8 半定量RT-PCR检测心肌组织中SK2和RyR2表达强度

2．9 Western blot测定RyR2和SK2蛋白表达

3 统计方法

4 质量控制

5 技术路线图

结果

讨论

小结

致谢

参考文献

综述 心房颤动时心肌肌浆网钙释放通道RyR2的表达及功能变化的研究进展

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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