磷酸甘露糖异构酶基因表达载体的构建及植物遗传转化正筛选系统的建立

摘要

根据GENBANK数据库中大肠杆菌(Escheriachiacoli)的磷酸甘露糖异构酶基因(phosphomannoseisomerasePMI)序列设计引物，通过PCR的方法得到约1200bp片段并与克隆载体pGM-Teasy连接，经测序证明与已发表PMI序列同源性达到100％。将其作为选择基因，构建到植物表达载体pBI-121上，得到可以在含有甘露糖的培养基上筛选的pBI-PMI、pBI-NPTII-PMI及pBI-k88-PMI的表达载体。通过对普通烟草(NicotianatabacumL.)、番茄(LycopersiconesculentumMill.)、紫花苜蓿(MedicagosativaL.)和甜瓜(CucumismelonL.)(伽师瓜)的甘露糖敏感性测验结果发现：普通烟草和紫花苜蓿不能用此转化系统进行筛选。甜瓜(伽师瓜)和番茄LIGEER87-5可以用并得到较适合的筛选培养基：甘露糖浓度分别是19％和8％。以甜瓜(伽师瓜)(CucumismelonL.)，番茄(LycopersiconescμlentumMill.)LIGEER87-5为受体材料，通过根癌农杆菌EHAl05(pBI-PMI、pBI-NPTII-PMI及pBI-k88-PMI)介导进行转化，获得了一批经甘露糖筛选后的甜瓜和番茄芽，且这些分化芽能够在含有甘露糖培养基上生长。通过氯酚红(CPR)法对转基因甜瓜叶片的磷酸甘露糖异构酶做了定性分析，进一步证明成功建立了以PMI为标记基因的选择系统。实验结果表明，此转化系统可以用于转基因甜瓜和转基因番茄的筛选。 实验一PMI基因的克隆及植物表达载体的构建摘要：根据GENBANK数据库中大肠杆菌的磷酸甘露糖异构酶基因(phosphomannoseisomerase，PMI)序列设计引物，通过PCR的方法得到约1200bp片段并与克隆载体pGM-Teasy连接，经测序证明与公布的PMI序列同源性达到100％。通过内切酶消化、连接等方法进一步构建了含有不同标记基因及目的基因的植物表达载体pBI-PMI、pBI-N-PMI及pBI-k88-PMI。

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英文缩略词表

前言

文献综述转基因植物的安全性问题

实验一PMI基因的克隆及植物表达载体的构建

实验二甜瓜与番茄的遗传转化

本文的主要结论

创新点

致谢

作者简历

附录

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