北疆大蒜病毒病的调查和洋葱黄矮病毒的鉴定及序列分析

摘要

大蒜是新疆重要的蔬菜作物之一,在北疆大田生产中大蒜植株出现条纹花叶、矮化、畸形、坏死等明显的病毒病症状,严重影响大蒜了生产及其产量。 本文分别在新疆天山以北的乌鲁木齐、石河子、吉木萨尔、伊犁昭苏、兵团农四师76团等大蒜主要种植区,采集症状表现明显的样品。通过电子显微镜观察,可以观察到大小为780×11nm的病毒粒体。依据已报道的大蒜常见病毒的核苷酸序列设计特异性引物,以带毒大蒜总RNA为模板,进行反转录PCR扩增,只有OYDV的特异性引物可扩增得到长1402bp左右的片段,将PCR产物连接到PMD18-T载体中再转化到大肠杆菌TOP10。通过菌落PCR鉴定,可得到大小为1402bp左右的片段,对5个阳性克隆进行序列测定,用DNAMAN软件分析,片段大小为1402bp,编码467个氨基酸；5个克隆可分为两组,并且两组间有较显著差异,两组间核苷酸同源性为81％,氨基酸同源性达85％；其中XJJM-3,XJJM-6为一组,组内核苷酸同源性达99％,氨基酸同源性达98％,与已报道的来自山东金乡的AJ409311高度同源,核苷酸同源性最高达99％,氨酸序列同源性最高达99％；XJJM-2,XJJM-4.XJJM-5克隆为一组,组内核苷酸同源性达99％,氨基酸同源性达99％,与已报道的来自日本的.AB000481高度同源,核苷酸同源性达98％,氨酸序列同源性达98％。

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论文说明：主要符号表

声明

第一章文献综述

1.1大蒜病毒病研究概况

1.2引起大蒜病毒病的毒源种类

1.2.1马铃薯Y病毒属(Potyvirus)

1.2.2麝香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)

1.2.3青葱X病毒属(Allexivirus)

1.3大蒜病毒的检测方法

1.3.1外观症状诊断法

1.3.2生物学测法（指示植物鉴别法）

1.3.3电子显微镜法

1.3.4血清学技术

1.3.5分子生物学技术

1.4目前大蒜病毒病研究中存在的问题

1.5论文选题及欲解决的问题

第二章材料与方法

2.1大蒜病毒病害田间调查

2.2材料

2.2.1毒源

2.2.2菌株和载体

2.2.3酶及试剂

2.2.4主要仪器

2.2.5培养基及主要溶液的配制

2.3方法

2.3.1电镜观察

2.3.2 RT-PCR

2.3.3 RT-PCR产物的克隆与序列分析

第三章结果与分析

3.1北疆大蒜病毒病发生症状

3.2电镜观察结果

3.3病样基因组总RNA的提取

3.4 RT-PCR结果

3.5北疆大蒜病毒分离物PCR片段的克隆及序列分析

3.5.1北疆大蒜病毒分离物的菌落PCR鉴定

3.5.2序列分析

第四章结论与讨论

参考文献

附录

常用缓冲液及培养基配方

致 谢

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