DC在高危角膜移植排斥反应中免疫调节机制的实验研究

摘要

目的:培养和诱导大鼠骨髓来源的树突状细胞(dendriticcell,DC),研究未成熟树突状细胞(immaturedendriticcell,imDC)对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用,探讨imDC诱导免疫耐受的机制。
　　方法:联合应用重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophagecolonystimulatingfactor,GM-CSF)和白细胞介素(Interleukin,IL)-4培养、诱导、扩增大量的imDC,肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor,TNF-α)诱导其成为成熟树突状细胞(maturedendriticcell,mDC),结合形态学、细胞表面标志加以鉴定;以60只SD大鼠为受体,30只Wistar大鼠为供体,碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模型。受体SD大鼠随机分为对照组、imDC组和mDC组,每组20只;对照组:术前7d经尾静脉注射PBS液0.1ml;imDC组和mDC组分别于术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的imDC和mDC1×106个。术后每日裂隙灯下观察各组角膜植片存活情况并评分;于术后3d、7d、14d三个时间点,每组随机处死4只受体大鼠,取角膜植片行HE染色;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测角膜植片Th1型细胞因子(IL-12、IL-15、IL-18)和Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)mRNA表达水平;蛋白印迹法(Westernblot)分析检测各组大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞表面特异性标志转录因子Foxp3的表达。
　　结果:通过联合应用重组大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三种细胞因子,培养、诱导、扩增大量的DC,经倒置相差显微镜、扫射电镜的形态学观察、流式细胞仪进行免疫学表型检测,可证实为不同成熟状态下的DC。角膜移植术后,观察角膜植片存活时间,imDC组植片存活时间与对照组、mDC组比较显著延长,差异具有统计学意义(均为P<0.05);RT-PCR检测:imDC组Th1型细胞因子IL-12、IL-15、IL-18mRNA表达较对照组和mDC组明显降低;Th2型细胞因子IL-4、IL-10mRNA表达明显升高;Westernblot检测:各时间点Foxp3表达的相对吸光度值imDC组均明显高于对照组和mDC组,差异有统计学意义(均为P<0.05)。
　　结论:通过联合应用重组大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三种细胞因子能培养、诱导、扩增出大量的DC;输注体外培养的供体骨髓来源的imDC可以诱导角膜移植免疫耐受,减轻免疫排斥反应,有效延长移植物的存活时间;imDC可能主要通过诱导Th1/Th2细胞偏移和CD4+CD25+调节性T细胞的扩增参与免疫耐受的形成。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

英文缩略语表

前言

材料与方法

1材料

2 实验方法

结果

1 倒置相差显微镜观察DC形态

2 扫描电镜观察DC形态

3 流式细胞仪检测DC免疫表型

4 碱烧伤后角膜新生血管的形态学观察

5 术后角膜移植片排斥反应观察情况

6 HE染色

7 RT-PCR检测IL-12、IL-15、IL-18、IL-4、IL-10mRNA表达

8 Western blot 检测各组Foxp3的表达结果

讨论

1大鼠骨髓来源树突状细胞的体外培养与鉴定

2 DC在高危角膜移植排斥反应中的作用

3 imDC诱导Th1/Th2偏移抑制大鼠高危角膜移植排斥反应

4 imDC诱导调节性T细胞抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应

结论

参考文献

附图

综述

致谢

作 者 简 介

石河子大学硕士研究生学位论文