石河子及北屯地区猪TTV及PCV2的基因检测及基因型分析

摘要

猪源输血传播病毒(Torque Teno virus,TTV)在世界大部分猪场都有较高的感染率。人源TTV感染人后,会发生重型肝炎等症状;圆环病毒2型(Circovirus type2,PCV2)是影响和诱发猪死亡和发病的重要病原之一。为了解石河子及北屯地区猪源TTV及PCV2的感染情况,并进一步研究猪源TTV与圆环病毒2型间是否存在协同影响的作用,本研究对在石河子地区及北屯地区猪源样品进行了TTV和PCV2的基因检测,并对流行毒株的基因型进行了分析。
　　研究中采用康为世纪公司的血液基因组小量提取试剂盒,对石河子屠宰场随机采集的206份猪抗凝血液、北屯地区屠宰场采集的72猪抗凝血液,及石河子周边猪场采集的不同日龄仔猪抗凝血液50份、母猪的抗凝血液10份进行DNA提取。根据相关数据合成了三对引物,建立了用于检测TTV1、TTV2及PCV2的聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测方法,在此基础上,对反应条件进行了优化,建立了检测TTV1和PCV2的双重PCR检测方法。利用本研究建立的PCR检测方法,对采集样品进行检查,同时选取部分阳性样品,对PCR产物采用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行回收纯化,对纯化的PCR产物进行TA克隆,经PCR鉴定后进行序列测定。主要结果如下:
　　1、石河子和北屯地区猪TTV1感染率为41.4％(140/338);TTV2的感染率为21.3%(72/338);TTV1和TTV2混合感染率为8.9%(30/338);PCV2的感染率为4.3%(12/278)。
　　2、在石河子地区检测的8例PCV2阳性样品中有5例为TTV1与PCV2混合感染,有1例为TTV2与PCV2混合感染,有1例为TTV1、TTV2与PCV2混合感染,一例为PCV2阳性。在石河子周边养猪场采集5份外观为PCV2发病猪,进行解剖,并进行PCR检测,发现5份病猪全部为PCV2及TTV混合感染。
　　3、选取部分阳性样品进行序列测定,将分离株的基因序列与Genbank登录的已知猪TTV1、TTV2、PCV2序列进行比对。结果显示本研究获得的TTV1序列与已报道序列的同源性为82.34%-95.59%;TTV2序列与已报道序列的同源性为83.75%-96.17%;所获PCV2序列与PCV2a参照序列之间的同源性为86.4%-87.4%,与PCV2b参照序列之间的同源性为92.9%-96.4%,表明所获PCV2序列为2b型。
　　4、建立了检测TTV1和PCV2的双重PCR方法。采用双重PCR方法检测检测临床样品与相应的TTV1 PCR检测结果和PCV2 PCR检测结果无明显差异。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

英语字母缩写和中英文全称对照表

前言

文献综述

1 TTV研究进展

2 猪圆环病毒2型

3 TTV与PCV2混合感染研究

第一章 石河子及北屯地区TTV的PCR检测及不同日龄TTV的感染情况对比

1 材料与方法

2 结果

3 分析与讨论

第二章 石河子及北屯地区PCV2型PCR检测及基因型分析

1 材料与方法

2 结果

3 讨论与结论

第三章 TTV1与PCV2双重PCR检测方法的建立

1 材料与方法

2 结 果

3 讨论

全文总结

参考文献

附录

致谢

作 者 简 介