石河子某规模化猪场仔猪腹泻病原诊断

摘要

2012年1月至6月份期间,新疆石河子周边某些猪场,2-7日龄哺乳仔猪陆续发生严重腹泻,先后死亡仔猪800余头,发病率90％,死亡率80%。患病仔猪精神沉郁,食欲废绝,排黄色水样稀粪,病程3-5d。病理剖解可见:肠系膜充血严重,肠系膜淋巴结肿大,小肠粘膜菲薄,剪开小肠其内容物呈黄色且含大量未消化的凝乳块。根据临床症状、流行病学及病理变化初步诊断为大肠杆菌引起的仔猪黄痢;为进一步确诊,对送检病料进行了致病菌的分离、生化鉴定、致病因子和毒力鉴定、病原体的分子生物学诊断,结果如下:
　　1.无菌采取病死哺乳仔猪肠内容物、肠系膜淋巴结等病理组织,涂片染色、镜检,同时将病料接种于LB肉汤中培养,将培养菌分别接种于麦康凯琼脂平板,兔鲜血琼脂平板;对分离致病菌进行生化试验、分子生物学鉴定、药物敏感试验。结果表明:分离株在麦康凯培养基上呈红色菌落;可使小白鼠在8h内死亡;生化鉴定及PCR鉴定为大肠埃希氏杆菌;分离株大肠杆菌对头孢菌素类和β-内酰胺类药物敏感。
　　2.通过PCR法和甘露糖血凝MRHA试验检测大肠杆菌的菌毛粘附素类型,采用兔回肠结扎试验检测不耐热肠毒素 LT,运用乳鼠胃内注射试验检测耐热肠毒素 STa。PCR和 MRHA结果表明本试验分离的大肠杆菌致病因子为987P,兔回肠结扎试验未检测到 LT,乳鼠胃内注射试验未检测到 STa。将致病大肠杆菌培养液100℃煮沸30min,取0.5mL注射给小白鼠,小白鼠在8h内死亡,表明分离株致病大肠杆菌可能有其它种类的耐热肠毒素。
　　3.用 RT-PCR法检测病死仔猪肠内容物中猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV),结果仅检测到 PEDV,将 PEDV的 M基因和 N基因与不同来源的 PEDV毒株进行比较分析,结果显示本试验检测到的 PEDV M基因与其他已发表的PEDV毒株M基因同源性为97.9-99.7%,N基因同源性为95.1%-96.4%;试验检测的PEDV的M基因与国内分离的CH-SC2-2012在同一分支上;PEDV的N基因与国内分离的 YT12-4在同一分支上。试验室诊断确定该猪场发病的主要病因为携带987P菌毛的致病性大肠杆菌和猪流行性腹泻病毒混合感染。

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前言

中英文对照表

一文献综述

1仔猪腹泻的症状、危害、常见病因

2国内外有关大肠杆菌的研究进展

3猪流行性腹泻研究进展

4仔猪腹泻的鉴别诊断

5仔猪大肠杆菌病的防治

6猪流行性腹泻病的防治

二试验研究试验一致病菌的分离、生化鉴定及药敏试验

1．试验材料

2．试验方法

3．结果与分析

4．讨论

试验二 致病性大肠杆菌致病因子的检测

1．材料

2．方法

3．结果与分析

4．讨论

5．小结

试验三、发病猪场流行性腹泻及传染性胃肠炎病毒的PCR检测及序列分析

1．材料

2．方法

3．结果与分析

4．讨论

5．小结

全文总结

创新点

参考文献

致谢

附录

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