新型人降钙素基因在大肠杆菌中的表达

摘要

该文利用PCR技术扩增新型人降钙素基因编码序列hCT*(将编码C-末端脯氨酸的密码子换为编码谷氨酰氨的密码子),将此基因克隆入大肠杆菌非融合型表达载体pBV220及融合型表达载体pET42a中.重组表达载体pET42a/hCT*转化到大肠杆菌BL21(DE3)plys中诱导表达,经SDS-PAGE证实细胞裂解物中含有与预期位置相同的融合蛋白,经Western Blot鉴定证明此融合蛋白具有人降钙素的免疫活性.表达条件优化后,可溶性蛋白的表达量占胞内总蛋白的10﹪.经超滤浓缩后,融合蛋白Xa因子作用下产生重组的新型降钙素,进一步分离纯化得到该蛋白的初级纯品.大鼠体内降血钙试验表明新型降钙素具有降血钙活性.

目录

前言

材料与方法

结 果

讨 论

参考文献

致 谢

附 录