人参皂甙Rh致MCF-7/ADM凋亡和逆转MCF-7/ADM多药耐药性的基础研究

摘要

第一部分：乳腺癌耐药细胞株体外模型的建立及其耐药机理研究 肿瘤细胞的多药耐药性(Multidrug resistance，MDR)是指肿瘤细胞接触一种抗癌药物产生耐药的同时，对其它结构和作用机理不同的抗癌药物亦产生交叉耐药。MDR的原因是复杂的，但MDRl基因过度表达产生的P-糖蛋白(Permeability glycoprotein，P-gp)是MDR产生的最重要原因。本实验拟针对P-gP介导的多药耐药现象，建立人乳腺癌细胞系MCF-7的耐药细胞株，以便为探讨乳腺癌细胞MDR的发生机制，并探寻逆转MDR的有效方法和药物提供理想的体外实验模型。 方法：通过阿霉素浓度梯度诱导法逐步培养出MCF-7的耐药细胞株 MCF-7/ADM。MTT 法测定并比较阿霉素(ADM) 对 MCF-7 细胞和MCF-7/ADM 细胞的IC<,50>；通过罗丹明123滞留实验比较MCF-7细胞和MCF-7/ADM 细胞内罗丹明123荧光强度的差别；RT-PCR和流式细胞仪比较 MCF-7 细胞和MCF-7/ADM 细胞内mdrl mRNA表达及P-gp表达的不同。 结论：MCF-7/ADM细胞具有典型的MDR现象，其产生EMDR的机制主要为MDR1基因过度表达，导致P-gP过度表达，从而使细胞内药物浓度减少。此耐药细胞株的建立为进一步研究肿瘤细胞多药耐药的发生机制和研究逆转耐药方法提供了理想的实验工具。 第二部分：人参皂甙Rh<,2>对MCF-7及MCF-7/ADM的抑制作用研究 目的：近年来，人们逐渐认识到促进肿瘤细胞的凋亡是恶性肿瘤治疗的新目标。大量研究表明，单味中药的有效成分及复方制剂在诱导肿瘤细胞凋亡中可以起重要作用。人参(PanaxginsengC.A)为五加科多年生草本植物，其成分具有诸多生物活性，人参皂甙Rh<,2>是由人参中提取的天然活性成分。大量研究证明Rh<,2>具有非常显著的抗肿瘤作用，其抗肿瘤药理作用值得深入的研究。本研究拟以人乳腺癌细胞系MCF-7为受试对象，旨在研究Rh<,2>在抑制MCF-7和MCF-7/ADM细胞增殖方面的作用及机理。 结论：人参皂甙Rh<,2>通过不同机制抑制了MCF-7和 MCF-7/ADM 细胞的增殖：Rh<,2>主要通过导致MCF-7 细胞坏死而抑制其增殖；而对于MCF-7/ADM 细胞，则主要是通过Caspases途径诱导其凋亡。Rh<,2>诱导耐药细胞系 MCF-7/ADM 凋亡的研究结果显示其在抗肿瘤作用方面的独特性。 第三部分：人参皂甙Rh<,2>逆转MCF-7/ADM 多药耐药性的研究 目的：恶性肿瘤对化疗药物的多药耐药是当今肿瘤化疗失败的主要原因，而MDR1基因过度表达产生的P-gp是多药耐药性产生的最重要原因，P-gp属于ABC(ATP-binding Cassette)转运蛋白家族的一员，是一种能量依赖性药物转出泵，能将化疗药物从癌细胞内泵出细胞外，从而使药物在细胞内积蓄浓度降低，药物的细胞毒作用降低，导致肿瘤化疗的失败。因此，寻找低毒、有效的MDR逆转剂是肿瘤化疗领域急需解决的问题。中药治疗肿瘤不仅毒副作用小，而且作用途径比较广泛。近年大量研究表明，许多单味中药的有效成分及复方制剂在体外实验中有逆转肿瘤细胞MDR的作用。本实验的研究目的为：人参皂甙Rh<,2>作为抗肿瘤作用非常显著的中药单体，是否具有逆转肿瘤细胞多药耐药性的作用，并探寻其机理。 结论：体外实验中，人参皂甙Rh<,2>可以有效逆转P-gp介导的MCF-7/ADM 的耐药性，是一种安全、高效的MDR逆转剂，可能成为具有广阔前景的抗肿瘤药物。

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摘要

前言

第一部分乳腺癌耐药细胞株体外模型的建立及其耐药机理研究

对象和方法

结果

讨论

第二部分人参皂甙Rh2对MCF-7及MCF-7/ADM抑制作用研究

对象和方法

结果

讨论

第三部分人参皂甙Rh2逆转MCF-7/ADM多药耐药性的研究

对象和方法

结果

讨论

结论

参考文献

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发表论文2

致谢