新生小鼠视网膜光感受器前体细胞的培养和鉴定

摘要

目的：对新生小鼠视网膜光感受器前体细胞进行分离、体外培养，鉴定其性质，证实新生小鼠视网膜存在光感受器前体细胞、并具有神经干细胞的特性，具有分裂增殖能力和分化潜能，为进行视网膜光感受器前体细胞移植治疗视网膜光感受器损伤提供基础。 方法：取同窝新生小鼠(生后1—7d)的视网膜，应用细胞培养技术，进行体外视网膜细胞培养、扩增，在倒置相差显微镜下观察其生长状况。通过细胞免疫组化和免疫荧光的方法，对视网膜光感受器前体细胞性质进行分析(Brdu、Nestin、Nrl、Opsin等标记物鉴定)。证实新生小鼠视网膜细胞中存在处于有丝分裂期并处于分化成成熟视网膜细胞前期的前体细胞，即视网膜光感受器前体细胞。 结果：来自新生小鼠视网膜的细胞，在特定的培养基中能贴壁生长，传代后对培养细胞进行Brdu、Nestin、Nrl、Opsin荧光免疫组化标记，标记结果显示：(1)生长的大部分细胞为BrdU阳性细胞，表明贴壁生长传代的细胞主要是由分裂增殖的细胞组成。(2)培养细胞可表达神经干细胞的特异性抗原Nestin。表明培养的细胞具有神经干细胞特性。(3)培养的细胞能表达Nrl(神经视网膜亮氨酸链，有丝分裂后的视网膜光感受器所特有的转录因子，并持续存在在成年视杆细胞中)，且来自出生后3-4天的小鼠视网膜细胞中Nrl阳性细胞数达到高峰，表明培养细胞处于视网膜祖细胞向视网膜光感受器细胞分化的中间阶段，具有向视网膜光感受器细胞分化和表达视蛋白的潜能。(4)培养的细胞大部分不表达视紫红质opsin(视紫红质蛋白，成熟视网膜光感受器细胞所表达)，表明培养细胞处于未分化成成熟视网膜细胞的前期。 结论：(1)新生小鼠视网膜处于光感受器细胞生发的高峰期，3-4天达到最高峰。(2)处于此期的新生小鼠视网膜细胞是处于个体生发中心后期并处于分化成成熟视网膜光感受器细胞前期的前体细胞，称为视网膜光感受器前体细胞。(3)视网膜光感受器前体细胞具有分裂增殖能力和分化潜能，而且已经表达转录因子Nrl，能促使其向成熟光感受器细胞分化。

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综述：干细胞移植治疗视网膜疾病的研究现状

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