mtDNA4977bp缺失预测肿瘤细胞放射敏感性的体外研究

摘要

目的： 研究不同单次剂量X射线照射前列腺癌细胞(PC-3)、肝癌细胞(HepG2)和食管癌细胞(EC-9706)所诱导的mtDNA4977bp缺失，比较经照射后细胞的存活分数，探讨mtDNA4977bp缺失用于肿瘤细胞放射敏感性检测的可行性。 方法： 利用不同剂量的X射线对体外培养的前列腺癌细胞(PC-3)、肝癌细胞(HepG2)和食管癌细胞(EC-9706)进行照射。(1)照射后用改进高盐沉淀法提取细胞线粒体基因；应用普通PCR方法扩增内参片段，应用巢式PCR方法扩增发生mtDNA4977bp缺失的片段；PCR产物凝胶电泳并采集图像，用mtDNA4977bp缺失片段的灰度值与mtDNA内参片段的灰度值之比代表每个照射剂量总体线粒体模板中存在mtDNA4977bp缺失所占的相对比例。(2)应用MTT比色法测定照射后细胞的存活分数。(3)根据存活分数拟合肿瘤细胞的剂量存活曲线；应用SPSS13.0软件进行统计分析，比较三种肿瘤细胞经不同剂量照射诱导的mtDNA4977bp缺失率；比较mtDNA4977bp缺失检出率与细胞存活率之间的关系。 结果： 1、提取三种肿瘤细胞mtDNA样品，在稍大于15000bp处出现亮度不等的条带，与mtDNA理论值(16569bp)的位置一致； 2、X线照射后肿瘤细胞的存活分数，随着照射剂量的增大而减小，小剂量阶段(0Gy、1Gy、2Gy)细胞存活分数下降幅度较小，存活分数均在50％以上；较大剂量阶段，尤其是8Gy照射后细胞存活很少，在同一剂量HepG2的存活分数最低，PC-3最高，EC-9706介于二者之间。 3、普通PCR扩增的mtDNA内参片段和巢式PCR扩增的mtDNA4977bp缺失片段与理论预计位置一致。随着照射剂量的增加，三种肿瘤细胞由放射诱导的mtDNA4977bp缺失有所增加；1Gy和2Gy照射后三种肿瘤细胞的mtDNA4977bp缺失率在统计上无显著性差异；40y照射后PC-3分别与HepG2、EC-9706之间存在统计学差异，HepG2和EC-9706之间无统计学差异；8Gy照射后HepG2和EC-9706的缺失率仍在增加，而PC-3的缺失率下降，PC-3的辐射诱导缺失率低于另外两种细胞，但HepG2和EC-9706的缺失率无统计学差异。 4、mtDNA4977bp缺失的检出率与MTT法测定的细胞存活分数具有一致性。 结论： 本实验测定三种肿瘤细胞经X线照射后的存活分数，比较其放射敏感性，同时应用巢式PCR扩增由照射引起mtDNA4977bp缺失的基因片段，发现其mtDNA4977bp缺失与放射敏感性的关系，得出结论如下： 1.MTT法测定的三种肿瘤细胞的存活分数，拟合曲线符合细胞多靶单击模型的细胞生存曲线一般特征，得出HepG2具有较高的辐射敏感性，PC-3辐射敏感性相对最低，EC-9706辐射敏感性介于二者之间。 2.电离辐射诱导能够出mtDNA4977bp缺失，并与照射剂量呈正相关。得出HepG2和EC-9706较PC-3更敏感，HepG2和EC-9706的mtDNA4977bp缺失率无差异。 3.肿瘤细胞存活分数的比较结果和电离辐射诱导mtDNA4977bp缺失率的比较结果具有一致性，而且相关分析后认为HepG2和EC-9706细胞由电离辐射诱导的mtDNA4977bp缺失在一定程度上反映细胞放射敏感性。本研究建立的检测由放射诱导的mtDNA4977bp缺失的方法，可能成为临床预测肿瘤细胞的放射敏感性的方法。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

前言

对象和方法

结果

讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 mtDNA4977bp缺失作为生物标记的研究现状

致谢