血清糖链抗原125均相化学发光免疫检测体系的建立

摘要

作为女性最常见的恶性肿瘤之一，卵巢癌在新型化疗及靶向治疗药物层出不穷的今天其死亡率仍居高不下;主要原因是卵巢癌患者不能得到早期诊断，这使得早期发现并及时诊断变得至关重要。作为全球多机构建议作为危险因素筛查、（有遗传综合征个体）早期诊断及鉴别诊断、疗效和复发监测、预后判断的肿瘤标志物之一的糖链抗原125(CA-125)就变得非常重要。
　　 CA-125是Bast等人用人卵巢浆液腺瘤细胞系OVCA433免疫小鼠后获得的OC125鼠抗人单克隆抗体检测到抗原分子。首个CA125免疫测定方法是利用OC125抗体同时用于捕获和检测并于1983年被商品化，目前CA125测定常用的方法有酶联免疫法、化学发光免疫分析法及电化学发光免疫分析法等。
　　 基于鲁米诺氧途径免疫分析技术(LOCI)的均相化学发光免疫分析技术与传统的非均相免疫分析技术相比，具有灵敏度高、时间分辨能力强、线性范围宽、背景荧光低、免洗板、性质稳定、快速简便、易于微量化自动化等优点。
　　 目的:
　　 采用基于鲁米诺氧途径免疫分析(LOCI)技术的AlphaScreen平台均相发光免疫分析技术研发血清糖链抗原125(CA125)均相免疫检测体系并对其进行方法学和临床评价。
　　 方法:
　　 兔抗人CA125多克隆抗体及鼠抗人CA125单克隆抗体分别标记受体微球、生物素，组成两对抗体组合，利用棋盘滴定确定较佳抗体组合;利用棋盘滴定法确定抗体标记受体微球及生物素化抗体的最适浓度，并对检测缓冲体系、试剂加样顺序、试剂加样比例及不同阶段反应时间进行优化。在优化基础上建立四参数拟合方程的校准品剂量-反应曲线，根据曲线即可由未知浓度临床标本的发光信号值得出其CA125浓度。根据上述曲线对临床标本进行检测并做方法学及临床评价。研究中采用ELISA Calc软件进行相关统计分析。
　　 结果:
　　 本检测试剂用兔抗人CA125多克隆抗体包被受体微球，生物素标记鼠抗人CA125单克隆抗体及链霉亲和素包被供体微球共同组成血清CA125检测体系，以附录中说明书作为操作指南，批内精密度为3.93％-4.40％，批间精密度为5.60％-8.39％;功能灵敏度为3.91U/ml，分析灵敏度为3.49U/ml;回收率为105.14％-108.74％，;特异性分析中溶血、黄疸和类风湿疾病的干扰率均＜10％;本研究所建立检测体系检测80例健康人CA125浓度上限为26.53U/ml;采用本方法检测50份临床标本结果与Roche Elecsys2010电化学发光法所得结果具有良好的相关性，r2=0.974; Z=0.623;使用x2检验及一致性分析推断本试剂与进口电化学发光检测试剂无统计学差异。
　　 结论:
　　 本检测试剂可用于定量检测人血清CA125，且具有免洗涤，灵敏度高，准确性及重复性好，便于操作等优点，进一步研发有望推广临床应用。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状

研究目的

研究方法

一、糖链抗原125均相发光免疫检测体系的建立及反应条件优化

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

2 实验结果

2．1 抗体组合筛选

2．2 生物素化抗体及抗体包被受体微球最适反应浓度

2．3 检测缓冲体系的优化

2．4 供体微球的加样量

2．5 待测物与CA-125抗体包被受体微球的加样量优化

2．6 加样顺序的优化

2．7 第一阶段反应时间

2．8 第二阶段反应时间

2．9 检测体系的确定

3 讨论

3．1 均相免疫分析与非均相免疫分析

3．2 方法建立及实验条件的优化

4 小结

二、糖链抗原125均相发光免疫检测体系的方法学及临床评价

1．材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

2 结果

2．1 方法学评价

2．2 临床评价

3 讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 鲁米诺氧途径免疫分析技术研究进展及应用

致谢