乳腺癌患者髓系来源抑制细胞的临床观察及相关免疫耐受机制探讨

摘要

目的:检测乳腺癌患者肿瘤原位组织分离的一群髓系来源抑制细胞(MDSC)中吲哚胺2，3双加氧酶（indoleamine-2，3-dioxygenase，IDO）的表达情况，探讨IDO对MDSC介导T淋巴细胞免疫抑制作用的影响。
　　 方法:收集30例乳腺癌患者的肿瘤组织和外周血，30例健康供者外周血，将肿瘤组织制成单细胞悬液，采用免疫磁珠技术分选肿瘤单细胞悬液中CD33+MDSC和健康供者外周血中的CD33+细胞，应用Western blot和PCR方法检测MDSC中IDO的表达情况。将肿瘤组织来源MDSC和异体T淋巴细胞按照1∶1比例混合培养3天，在加用和不加IDO特异性抑制剂1-MT条件下，利用Annexin-V凋亡试剂盒检测各组T淋巴细胞凋亡率，利用ELISA法检测各组T淋巴细胞分泌的细胞因子量。
　　 结果:在正常人外周血、乳腺癌患者外周血、乳腺癌患者肿瘤单细胞悬液中MDSC所占比例分别为（4.9±4.38）％、（12.92±6.24）％、（17.18±5.19）％。与正常人外周血相比，乳腺癌患者外周血和肿瘤单细胞悬液中MDSC比例显著升高(P＜0.05)，Western blot和PCR检测均发现此群MDSC中有IDO的过表达。T细胞单独培养时凋亡率为（2.40±0.66）％，MDSC和T细胞共孵育组中T细胞凋亡率为（12.30±0.80）％，比T细胞单独培养时显著升高(P＜0.05)，在共孵育过程中加用1-MT组的T细胞凋亡率为(3.30±0.58)％，与不加1-MT组差异具有统计学意义(P＜0.05)。细胞因子检测的结果发现MDSC促进T淋巴细胞TGF-β、IL-10的释放，抑制IFN-γ的分泌，而对IL-4和IL-12的分泌影响并不明显，而加用1-MT后MDSC和T淋巴细胞共孵育组中TGF-β、IL-10的分泌水平与未加1-MT组相比显著降低，IFN-γ的分泌显著增加(P＜0.05)。
　　 结论:乳腺癌病人原位肿瘤组织中Iin1-CD45+CD13+CD33+CD14-CD15-的MDSC具有显著的免疫抑制作用。此群表型特异的细胞能够显著促进自体淋巴细胞的调亡，并显著抑制其分泌IFN-γ，促进TGF-β、IL-10释放，MDSC发挥免疫抑制作用与IDO的过表达密切相关，通过抑制IDO酶活性可以纠正MDSC介导的免疫抑制作用。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1．1 研究对象

1．2 研究方法

1．2．1 实验材料

1．2．2 实验方法

1．3 统计方法

结果

2．1 流式细胞仪检测细胞表型

2．1．1 流式细胞仪检测正常人与乳腺肿瘤患者体内MDSC的含量水平

2．1．2 利用免疫磁珠分选的方法获得MDSC的纯度

2．2 PCR检测IDO的表达

2．3 Western blot检测IDO的表达

2．4 MDSC诱导T细胞凋亡

2．5 ELISA检测结果

讨论

3．1 本研究中乳腺癌患者体内MDSC的表型特点

3．2 MDSC的表型特点概述

3．3 MDSC扩增及活化的机制

3．4 MDSC通过释放细胞因子介导免疫抑制

3．5 目前MDSC的产生及免疫抑制作用机制分析

3．6 MDSC通过影响局部代谢环境介导免疫抑制

3．7 结语

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 髓源性抑制细胞介导的免疫抑制研究进展

致谢