连翘提取物（单体及单体最佳配比）对脓毒症大鼠的疗效评价

摘要

目的:
　　观察连翘提取物（单体）对脓毒症大鼠术后48h、72h及1周存活率的影响，初步筛选出最有效的前3种单体;引用单味中药有效单体（组效-量效）配伍的理念，运用正交设计的研究方法，得出最佳组份及配比;观察最佳配比对脓毒症大鼠血清内毒素、肿瘤坏死因子-α、白介素1、白介素6等炎症介质的影响及对凝血机制、肝肾功能等方面的影响。
　　方法:
　　(1)采用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)模型，术前12h禁食，不禁水，5％水合氯醛麻醉(350-400mg/kg)腹腔麻醉，麻醉满意后，前腹正中备皮，消毒腹部皮肤，于腹部正中做2.5cm切口，取出盲肠后，游离肠系膜和盲肠，距盲、回肠结合部约盲肠全长1/3处，4号手术缝线尽量回避血管结扎，于距结扎处远端约0.8-1cm处回避血管，三棱针(2.6×65mm)贯穿孔，3×30mm胶条贯穿盲肠留滞，放回腹腔，缝合切口。术后颈部皮下补液10mL，补充术中液体流失，抗休克;(2)分三个梯度（20％乙醇、50％乙醇、80％乙醇）分别对连翘进行提取，得到三种对应的连翘粗提取物后，分别予大鼠给药，观测大鼠48h、72h及1周的存活情况，选择对脓毒症大鼠最有效的连翘粗提取物，并以此实验结果为基础，对有效的连翘粗提取物进行进一步的单体提取，提纯连翘提取物混合成份中含量最多的4种成份，用连翘提取物混合成分中含量最多的4中成份分别进行动物实验，通过尾静脉注射给药的方法，观察各单体对脓毒症大鼠48h及72h的死亡率及生存时间的影响，初步筛选出对治疗脓毒症大鼠有效的单体;（3)对筛选出治疗脓毒症大鼠有效的单体，通过动物实验，运用正交设计，得出对脓毒症大鼠有治疗作用的3种单体的（组效-量效）关系，寻找最佳配比;(4)采用化学鉴别、核磁共振氢谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱（13C-NMR）、薄层色谱(TLC)、高效液相色谱(HPLC)等光谱色谱方法对所分离出的四个化合物进行结构鉴定，确定化合物的结构和名称（主要由天津药物研究院完成）;(5)通过动物实验，运用酶联免疫法及检验，研究连翘有效单体最佳配比对脓毒症大鼠术后24h、48h、72小时TNF-α、IL-1β、LPS、IL-6，血常规，肝肾功能，凝血机制的影响。
　　结果:
　　(1)50％连翘粗提取物对脓毒症有很好的治疗作用，能够在一定程度上降低脓毒症大鼠的死亡率，并相对延长脓毒症大鼠的生存时间;(2)记录9种不同产地连翘的指纹图谱;(3)分离出的四种化合物由鉴定可得出，一个木脂素类（连翘苷）、一个苯乙醇苷类（连翘酯苷A）、两个黄酮类（芦丁和槲皮素），连翘苷、连翘酯苷A及槲皮素均能降低脓毒症大鼠术后48h、72h及1周的死亡率，并相对延长脓毒症大鼠的生存时间;(4)单体连翘苷、连翘酯苷A及槲皮素在治疗脓毒症大鼠模型中的最佳配比为2∶3∶3;(5)在脓毒症病程的早期，连翘提取物能够拮抗机体炎症介质释放，活白细胞及凝血系统来阻止病原微生物（如细菌）的进一步扩散。
　　结论:
　　(1)50％连翘粗提取物对脓毒症大鼠有一定的治疗作用，能够在一定程度上降低脓毒症大鼠的死亡率，并相对延长脓毒症大鼠的生存时间;(2)连翘苷、连翘酯苷A及槲皮素组对脓毒症大鼠有很好的治疗作用;(3)单体连翘苷、连翘酯苷A及槲皮素在治疗脓毒症大鼠模型中的最佳配比为2∶3∶3。(4)连翘提取物能通过改善机体炎症反应、微血管凝血及血管内皮细胞损伤等因素，提高脓毒症大鼠的存活率。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、连翘化学成分的分离及单体鉴定

1．1 对象

1．1．1 仪器

1．1．2 试药

1．2 方法与结果

1．2．1 连翘大孔树脂纯化

1．2．2 50％乙醇洗脱部位浸膏化学成分分离

1．2．3 化合物结构和名称

1．3 讨论

1．4 小结

二、连翘粗提取物对脓毒症大鼠存活率的影响

2．1 对象和方法

2．1．1 材料

2．1．2 受试药制备

2．1．3 动物模型制备

2．1．4 动物的分组及给药

2．1．5 给药剂量

2．1．6 观察指标及检测方法

2．1．7 统计学处理方法

2．2 结果

2．3 讨论

2．3．1 脓毒症动物模型的评价

2．3．2 连翘的药理基础

2．4 小结

三、10种不同产地连翘药材的HPLC指纹图谱

3．1 对象

3．1．1 仪器

3．1．2 试剂与药品

3．2 方法与结果

3．2．1 色谱条件

3．2．2 对照品溶液的制备

3．2．3 供试品溶液的制备

3．4 方法学考察

3．4．1 精密度试验

3．4．2 稳定性试验

3．4．3 重复性试验

3．5 指纹图谱的测定与相似度计算

四、连翘提取物(单体)及单体最佳配比对脓毒症大鼠有效性的研究

第一部分 连翘提取物(单体)对脓毒症大鼠有效性的研究

4．1 对象和方法

4．2 结果

4．3 讨论

4．4 小结

第二部分 连翘提取物(有效单体)对脓毒症大鼠的最佳(组效-量效)配伍的研究

4．1 对象

4．2 方法和结果

4．3 讨论

4．4 小结

五、连翘单体(最佳配比)治疗脓毒症的机理研究

5．1 对象和方法

5．1．1 实验材料

5．1．2 检测指标及检测方法

5．1．3 数据处理及统计学方法

5．2 结果

5．2．1 血常规

5．2．2 出凝血时间

5．2．3 肾功能

5．2．4 肝功能

5．2．5 血生化

5．2．6 大鼠术后24、48、72h血清IL-1β、IL-6、TNF-α、LPS变化

5．3 讨论

5．3．1 一般检验结果分析

5．4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 脓毒症诊断的生物学标志物

致谢