Necrostatin-1对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

摘要

目的:通过建立大鼠肾缺血再灌注损伤(Ischemia-Reperfusion Injury, IRI)模型，观察其对大鼠肾病理、生化指标、炎症因子及细胞程序性坏死的影响，并观察Necrostatin-1(Nec-1)对肾的保护作用，探讨其可能的机制，为临床治疗肾缺血再灌注损伤提供理论依据。
　　方法:将90只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、DMSO对照组、Nec-1组，每组30只;每组按2h、12h、24h再分为3组，每组10只。DMSO对照组和Nec-1组采用夹闭双侧大鼠肾动脉45min再恢复血流的方法制成肾缺血再灌注模型，于模型完成前15min尾静脉给药。假手术组不夹闭双侧肾动脉。Nec-1组于再灌15min前尾静脉注射Nec-11mg/kg（由DMSO溶解），DMSO对照组注射等体积DMSO，假手术组只游离双肾，不作任何处理。模型成功后收集血清及肾脏组织;检测血清肌酐(serum creatinine，Scr)、血尿素氮(blood ureanitrogen，BUN);HE染色观察肾组织病理改变并计算肾小管坏死评分;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)浓度;Western blot方法检测受体相互作用蛋白1和3(RIP1，RIP3)的表达。
　　结果:1.与假手术组相比，DMSO对照组及Nec-1组大鼠各时间点Scr、BUN水平均升高(P＜0.01)，以DMSO组升高更为明显。随着时间推移，两组Scr、BUN水平均升高，Nec-1组大鼠各时间点Scr、BUN水平比DMSO对照组均降低(P＜0.05)。
　　2.假手术组大鼠肾组织结构清晰，肾小管上皮细胞完整，排列整齐。DMSO对照组肾小管结构异常，细胞脱落坏死、肿胀、管型形成、炎细胞浸润明显。与DMSO对照组相比，Nec-1组细胞脱落坏死、肿胀、管型形成均减轻，炎细胞相对减少。与假手术组相比，DMSO组与Nec-1组大鼠各时间点肾小管坏死评分均明显升高(P＜0.01)以DMSO组升高更为显著。随着时间推移，两组Scr、BUN水平均升高，Nec-1组大鼠各时间点肾小管坏死评分水平比DMSO对照组均降低(P＜0.05)。
　　3.DMSO对照组及Nec-1组大鼠各时间点TNF-α、IL-1β表达比假手术组明显升高(P＜0.01)，以DMSO组升高更为明显。随着时间推移，两组TNF-α、IL-1β水平均升高，Nec-1组大鼠各时间点TNF-α、IL-1β比DMSO对照组均降低(P＜0.01)。
　　4.假手术组RIP1和RIP3蛋白的表达量很低。与假手术组相比，DMSO对照组及Nec-1组RIP1和RIP3蛋白从2h开始就有较明显表且的表达，且随时间升高(P＜0.01)。随着时间推移，两组RIP1和RIP3蛋白水平均升高，与DMSO对照组相比，Nec-1组RIP1和RIP3蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论:1.肾缺血再灌注损伤可导致大鼠肾组织结构破坏，细胞脱落坏死，肾小管坏死评分明显升高，反应肾功能水平的Scr、BUN水平均升高。Nec-1能有效减轻肾缺血再灌注损伤，改善肾功能。
　　2.肾缺血再灌注损伤可激活大鼠免疫反应，引起TNF-α、IL-1β等炎症因子明显升高。Nec-1能有效抑制免疫炎症反应，减轻损伤。
　　3.肾缺血再灌注损伤可引起严重的程序性坏死，RIP1和RIP3蛋白升高明显。Nec-1能抑制RIP1和RIP3蛋白活性，减轻程序性坏死对肾组织损伤程度。
　　4.Nec-1能明显改善大鼠肾缺血再灌注损伤组织破坏、炎症反应，减少程序性坏死的发生，其机制可能与抑制细胞程序性坏死有关。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1 对象和方法

1．1 分组及模型制备

1．1．1 动物分组及给药

1．1．2 肾缺血再灌注损伤动物模型的制备

1．2 标本采集及处理

1．2．1 血标本

1．2．2 肾脏组织标本

1．3 主要仪器和设备

1．3．1 主要试剂

1．3．2 主要设备

1．4 检测指标及方法

1．4．1 肾功能指标测定

1．4．2 肾组织病理学检查

1．4．3 炎症指标的检测

1．4．4 Western法检测RIP1和RIP3

1．5 统计学处理

2 结果

2．1 一般情况观察

2．2 各指标的变化

2．2．1 血清Scr、BUN的变化

2．2．2 肾脏HE染色光镜观察及肾小管坏死评分的变化

2．2．3 血清TNF-α、IL-1β的变化

2．2．4 RIP1和RIP3蛋白在肾组织中的表达

3 讨论

3．1 Necrostatin-1对大鼠肾缺血再灌注损伤病理的改变

3．2 Necrostatin-1对大鼠肾缺血再灌注损伤生化的影响

3．3 Necrostatin-1对大鼠肾缺血再灌注损伤炎症的影响

3．4 Necrostatin-1对大鼠肾缺血再灌注损伤RIP1-RIP3的影响

4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 程序性坏死机制的研究进展

致谢