吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)抑制尿毒症大鼠主动脉钙化的研究

摘要

目的:心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)是终末期肾脏病(end-stagerenal disease，ESRD)的主要死因，大约50％ ESRD患者死于CVD，是普通人群的20-30倍。因此，有关ESRD心血管并发症的原因及防治措施一直是国内外学者探讨的的重点课题。血管钙化是ESRD患者发生CVD的独立危险因素。现有研究认为，影响CKD患者血管钙化的因素除了传统因素（如高血压、脂代谢异常、糖尿病，高龄、吸烟）外，还包括非传统因素，如钙磷代谢异常、氧化应激、炎症介质等。NF-κB是炎症的重要介质。已经证实，NF-κB参与了尿毒症血管钙化过程。本研究旨在探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)对尿毒症大鼠主动脉钙化的干预作用及相关机制。
　　方法:16只雄性Sprague-Dawley大鼠，随机分为尿毒症模型组及PDTC干预组，均以0.75%腺嘌呤及高磷饮食喂养，制备尿毒症动脉钙化模型，干预组同时腹腔注射PDTC100mg/kg/d。另取8只匹配大鼠作为健康对照组。8周后处死大鼠，HE及von Kossa染色观察腹主动脉病理改变及钙化情况，免疫组织化学方法检测OPN、Cbfα-1在主动脉的定位表达，Western印迹检测主动脉NF-κB总p65与细胞核p-p65、骨桥蛋白(OPN)、核心结合因子α1（Cbfα-1）蛋白表达。
　　结果:造模4周及8周，尿毒症组、PDTC干预组大鼠血清Scr、血磷、钙磷乘积均显著高于对照组（均P＜0.01），但此两组间差异无统计学意义(P＞0.05);给药8周，主动脉均出现明显钙化，以中膜钙化为主，但PDTC干预组程度较轻(P＜0.05);免疫组化显示，大鼠主动脉OPN表达于中膜及外膜，Cbfα-1表达于中膜细胞核，二者在PDTC干预组表达均较尿毒症组下降（均P＜0.05）;Western印迹结果显示，PDTC干预组主动脉NF-κB总p65、核p-p65、OPN、Cbfα-1表达均较尿毒症组下降(均P＜0.01)，且Cbfα-1表达与p65、核p-p65表达均呈正相关(r=0.707，P=0.000;r=0.507，P=0.000)。
　　结论:PDTC可部分阻断NF-κB p65核转位所致尿毒症大鼠血管平滑肌细胞向成骨细胞转分化及主动脉钙化。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1．对象和方法

1．1 实验对象与饲料

1．2 实验试剂

1．3 实验设备

1．4 实验耗材

1．5 实验方法与步骤

1．6 血管组织形态学检查

1．7 血管组织Western-blot检测

1．8 统计方法

2．结果

2．1 一般状态

2．2．血肌酐(Scr umol／L)随时间变化

2．3 血钙、血磷、尿钙、尿磷水平随时间变化

2．3．1 血磷随时间变化情况

2．3．2 血钙随时间变化情况

2．3．3 血钙磷乘积随时间变化情况

2．3．4 尿磷排泄率随时间变化情况

2．3．5 尿钙排泄率随时间变化情况

2．4 血管组织形态学改变

2．4．1 血管HE染色

2．4．2 Von Kossa染色

2．4．3 动脉免疫组织化学检测

2．5 Western印迹检测各组大鼠主动脉NF-κB总p65与细胞核内p-p65、及骨桥蛋白(OPN)、核心结合因子α1(Cbfα-1)等蛋白表达

2．5．1 血管壁NF-κB p65及OPN、Cbfα-1蛋白表达定量分析

2．5．2 血管壁核蛋白NF-κB p-p65蛋白表达定量分析

2．5．3．NF-κB与Cbfα-1表达的相关分析

3．讨论

3．1 慢性肾衰竭血管钙化动物模型的制备

3．2．血管钙化

3．3．PDTC抑制血管钙化

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 氧化应激在慢性肾脏病血管钙化中的作用及研究进展

致谢