血小板反应蛋白-4在前列腺癌中的表达方式及生物学意义的研究

摘要

目的：
　　探讨THBS4异常表达在前列腺癌浸润和转移中的作用，并进一步明确其在异种移植动物模型中的表达机制。
　　方法：
　　通过cDNA基因芯片检测前列腺癌根治术后癌组织和癌旁组织中差异表达基因谱。我们通过文献检索、网络软件和生物信息学在线工具，对基因芯片筛选出的差异表达基因进行基因本体注释，了解差异表达基因的生物学功能、参与构成的细胞成份、参与调控的信号转导通路以及蛋白-蛋白间相互作用的关系网，从而明确前列腺癌组织和癌旁组织在生物学进程上的异同，并选定THBS4作为研究对象。为了验证基因芯片的结果，通过RT-PCR和免疫组化检测方法，利用10例新鲜前列腺癌和癌旁组织进行检测。为了深入探讨THBS4基因在前列腺癌中的表达与作用机制，通过免疫组化技术检测了60例前列腺癌石蜡组织标本，结合临床资料，进行Kaplan-meier生存分析和COX回归风险因素分析。最后，通过显微外科技术建立前列腺癌异种移植模型，通过常规H&E染色、冰冻切片、免疫组化检测等对模型进行鉴定，然后进一步检测THBS4在前列腺癌和增生异种移植模型中的表达情况，对前期实验结果进行验证。
　　结果：
　　前列腺癌与癌旁组织在基因表达上存在显著差异。THBS4基因在癌组织中较癌旁组织表现出一致的高表达。新鲜前列腺癌组织RT-PCR以及免疫组化证实了THBS4在癌组织中高表达。THBS4在前列腺癌间质组织和上皮细胞中表达，并且其表达与Gleason评分、病理类型及分期相关。结合COX回归分析显示:前列腺癌组织中THBS4高表达与转移导致的患者生存期下降显著相关。我们采用显微外科技术建立患者来源的前列腺癌和前列腺增生NOD/SCID小鼠肾包膜下异种移植模型。THBS4在良性前列腺增生小鼠异种模型中未见明显表达，在前列腺癌模型中的表达与原前列腺癌组织表达相近。典型的高表达出现在上皮细胞，靠近肾脏的肿瘤边缘间质中THBS4高表达。
　　结论：
　　我们通过前列腺癌根治术后癌组织和癌旁组织基因芯片获得了转录水平的差异表达基因普，表明前列腺癌间质在前列腺癌的发生发展中起到了重要作用。我们成功建立了NOD/SCID小鼠肾包膜下患者来源前列腺癌异种移植模型和NOD/SCID小鼠肾包膜下患者来源前列腺增生异种移植模型，并获得了较高的成瘤率。我们认为THBS4可以作为不同恶性程度或者不同阶段的前列腺癌细胞发生上皮-间质转化的标记物，结合Gleason评分、病理类型等可以作为前列腺癌的预后判定指标。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、前列腺癌基因表达谱的初步研究

1．1 对象和方法

1．1．1 研究对象

1．1．2 实验原理及步骤

1．1．3 差异表达基因的GO本体分析

1．1．4 差异表达基因的Pathway分析

1．1．5 差异表达基因的相互作用网络分析

1．1．6 差异表达基因的共表达分析

1．2 结果

1．2．1 RNA提取总量与质量控制

1．2．2 人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片V2．0的构建与质量控制

1．2．3 人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片V2．0检测结果及数据分析

1．2．4 差异基因功能聚类分析结果

1．2．5 差异基因功能代谢通路(Pathway)分析结果

1．2．6 差异表达基因的相互作用网络分析结果

1．2．7 差异表达基因的共表达分析

1．3 讨论

1．3．1 人类全基因组寡核苷酸基因芯片V2．0的基因筛选

1．3．2 基因数据的聚类分析

1．3．3 目的基因筛选

1．4 小结

二、THBS4在前列腺癌组织中的表达及临床意义

2．1 对象和方法

2．1．1 临床组织标本

2．1．2 引物

2．1．3 主要实验仪器

2．1．4 主要实验试剂及试剂盒

2．1．5 RT-PCR

2．1．6 Realtime PCR检测THBS4基因的表达情况

2．1．7 免疫组化法检测前列腺癌组织THBS4蛋白的表达

2．1．8 统计学处理

2．2 结果

2．2．1 前列腺癌及癌旁组织中THBS4 mRNA的表达

2．3．2 石蜡包埋前列腺癌组织中THBS4蛋白的表达

2．3 讨论

2．3．1 THBS4在前列腺癌和癌旁组织中的表达情况

2．3．2 THBS4在前列腺癌中表达的临床意义

2．4 小结

三、前列腺组织异种移植模型的建立及THBS4的表达

3．1 对象和方法

3．1．1 患者来源的前列腺癌和癌旁组织

3．1．2 实验动物

3．1．3 主要试剂及试剂盒

3．1．4 肾包膜下移植

3．1．5 组织鉴定和免疫组化标记

3．2 结果

3．2．1 组织生长情况及成活率

3．2．2 病理组织检查

3．2．3 THBS4在动物模型标本中的表达

3．3 讨论

3．3．1 前列腺癌组织肾包膜下异种移植模型

3．3．2 前列腺增生组织肾包膜下异种移植模型

2．3．3 THBS4在动物模型标本中的表达

3．4 小结

全文结论

论文创新点

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 血小板反应蛋白-4的研究进展

致谢