脐带间充质干细胞与脐血CD34+细胞联合移植治疗心肌梗死

摘要

目的:探讨缺氧预处理(HP)对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)免疫调节作用的影响;研究脐带间充质干细胞与脐血CD34+(UCB-CD34+)细胞联合移植对心肌梗死后心功能的影响，并比较联合移植与UC-MSCs单纯移植的治疗差异。
　　方法:CoCL2缺氧预处理UC-MSCs。UC-MSCs、外周血单个核细胞(PBMC)、UCB-CD34+于24孔板中共培养（分组:A1=HP-MSCs+hUCB-CD34+cells+PBMC; A2=hUC-MSCs+hUCB-CD34+ cells+ PBMC; Control=hUCB-CD34+cells+PBMC)，收集上清液，ELISA检测IL-10和IFN-γ。改良Fujita法建立日本大耳白兔心肌梗死模型，随机分为3组（每组8只）。MI后四周，采用心肌内注射法，将磷酸盐缓冲液(PBS)、hUC-MSCs、hUC-MSCs联合hUCB-CD34+细胞注射到梗死的周边部位（定义为PBS组、hUC-MSCs组和Cotrans组）。超声心动图检测基线、心梗后4周、细胞移植后4周的心功能。cTnI、CD31免疫组织化学染色，观察移植细胞的分化和在梗死或梗死周边血管新生的情况。HE和Masson染色观察心肌纤维化的程度。
　　结果:对照组、A1组到A2组，IFN-γ的量逐渐下降((27.00±1.11)pg/ml，(14.20±0.81)pg/ml，(7.22±0.14) pg/ml)，但是IL-10的量逐渐增加((31.68±3.08) pg/ml，(61.42±1.08) pg/ml，(85.85±1.80) pg/ml)。这暗示着hUCB-CD34+细胞可以引起外周血单个核细胞中的淋巴细胞的免疫反应，而hUC-MSCs和HP-MSCs可以抑制这种反应。但是这种免疫抑制效应被缺氧预处理减弱。细胞移植后4周，联合移植组拥有最少的胶原沉积和最好的心功能。cTnI阳性细胞和CD31阳性管状结构的存在，证明了细胞向心肌细胞和血管方向的分化。且在联合移植组血管密度远远多于hUC-MSCs单纯移植组。
　　结论:hUC-MSCs和HP-MSCs对淋巴细胞都具有免疫抑制作用，但是这种免疫抑制效应被缺氧预处理减弱。联合移植可以恢复心肌梗死后的心功能、减少胶原沉积。且联合移植较单纯hUC-MSCs移植更为有效。这种作用可能源于增加的心肌细胞分化和梗死区域增强的血管新生。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1 对象和方法

1．1 实验试剂与药物

1．2 主要试剂的配制

1．3 实验器材

1．4 实验动物

1．5 细胞的分离与培养

1．5．1 hUC-MSCs的分离培养

1．5．2 外周血单个核细胞的分离培养

1．5．3 hUCB-CD34+细胞的分离培养

1．6 流式细胞术

1．7 hUC-MSCs的缺氧预处理

1．8 ELISA Array

1．9 建模、细胞移植及指标检测

1．9．1 MI模型的建立

1．9．2 细胞移植

1．9．3 心功能评价

1．9．4 组织病理检查

1．9．5 免疫组织化学染色

1．9．6 血管密度测量

1．9．7 统计学分析

2 结果

2．1 细胞分离与培养

2．2 hUC-MSCs的免疫表型和CD34+细胞的纯度

2．3 ECG变化

2．4 ELISA检测

2．5 心功能评价

2．6 梗死心肌组织的病理学变化

2．7 免疫组化

2．8 血管密度

3 讨论

4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 间充质干／基质细胞的血管生成作用综述

致谢