miR-155在2型糖尿病患者外周血的表达及其与血管并发症的关系研究

摘要

血管并发症是糖尿病患者致残、致死的主要原因，其发生机制是复杂多样的，其中＂炎症学说＂得到了广泛的认可，各类炎症因子对糖尿病并发症的作用得到了进一步的证实。细胞核因子-kB（Nuclear factor kappa B，NF-kB）、可溶性细胞间粘附分子-1（Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1，sICAM-1）均为重要的炎症因子。而最新研究表明，微小RNA(MicroRNAs,miRNAs)作为调控细胞功能的关键因子，调节促炎因子及抑炎因子的表达，参与炎症的发生发展过程，并起关键调控作用。miRNAs是一组长度约22nt的内源性非编码单链RNA（ncRNA），其可通过结合靶基因3’端非翻译区，降解靶 mRNA或者阻制靶mRNA的翻译。miR-155作为一个具有炎性作用多种功能的miRNA分子，在低度炎症性疾病中扮演着重要角色。但miR-155在2型糖尿病(T2DM)患者外周血的表达和对于T2DM慢性血管病变发病机制的参与及调控作用的研究还很少。
　　目的：本研究通过检测T2DM患者外周血miR-155、NF-kB、sICAM-1mRNA的表达，分析其变化情况，探讨miR-155与NF-kB、sICAM-1的关系，和在T2DM慢性血管病变发生发展中可能的作用及机制，为研究 T2DM血管并发症找到新的切入点，为临床寻找新的治疗手段提供理论依据。
　　方法：选取T2DM(根据WHO1999年诊断和分型标准)患者65例，男35例、女30例，年龄61.79±10.55岁，病程11.73±7.93年，HbA1c(12.50±8.09)％。根据HbA1c水平将其分为：HbA1c<7%组、7%≤HbA1c<9%组、HbA1c≥9%组；按糖尿病病程分为病程<10年组、10年≤病程<20年组、病程≥20年组；按照T2DM慢性血管并发症有无及类型分组：单纯T2DM无血管病变组(A组)、血管并发症组(B组)， B组再进一步分为微血管病变组（B1组）、大血管病变组（B2组）、同时有微血管病变和大血管病变组（B3组）;将T2DM血管病变患者依据24h尿微量白蛋白定量分组：<30mg/24h为尿白蛋白正常组、30-300mg/24h为微量白蛋白尿组、≥300mg/24h为大量白蛋白尿组。所有患者均无糖尿病急性并发症，无感染、肿瘤、原发肝脏疾病和非糖尿病性肾脏疾病等。选择年龄、体重指数（BMI）相匹配的健康人30例作为对照组，男14例、女16例，血糖、血脂、血压均正常。测定所有研究对象血压、身高、体重，计算 BMI，并空腹8小时后晨起取肘静脉血，测定空腹血糖(FG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、血尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）；采用Realtime RT-PCR法检测外周血miR-155、NF-κB、sICAM-1mRNA的表达量；T2DM血管病变患者留24h尿标本测定微量白蛋白(24h-mAlb)水平。
　　结果:1.T2DM组miR-155、NF-κB、sICAM-1mRNA的表达均显著高于对照组(P均<0.05）。HbA1c≥9%组和病程≥20年组miR-155、NF-κB、sICAM-1mRNA的表达均显著高于HbA1c<7%组和病程<10年组（P均<0.05）；miR-155在7%≤HbA1c<9%组也明显高于HbA1c<7%组（P<0.05），sICAM-1在HbA1c≥9%组或10年≤病程<20年组也显著高于7%≤HbA1c<9%组或病程<10年组（P均<0.05）。
　　2. T2DM血管病变组(B组)miR-155、NF-κB、sICAM-1mRNA的表达显著高于单纯T2DM无血管病变组(A组)(P均<0.05)。B3组miR-155的表达较B2组和A组均显著升高（P均<0.05），B1组、B2组较A组也有升高，但差异无统计学意义(P均>0.05)；B1组、B2组、B3组NF-κBmRNA表达均显著高于A组，且B3组也明显高于B1组和B2组（P均<0.05）；B1组、B3组sICAM-1mRNA的表达显著高于A组（P均<0.05）。微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组miR-155、NF-κB、sICAM-1mRNA表达均明显高于尿白蛋白正常组，且大量白蛋白尿组miR-155、sICAM-1mRNA的表达也显著高于微量白蛋白尿组（P均<0.05）。
　　3.多元相关分析显示：miR-155与HbA1c、TG、NF-κB、sICAM-1明显相关（P均<0.05）；多元逐步回归分析显示：miR-155与 NF-κB、 sICAM-1呈正相关（P均<0.05）。
　　结论：T2DM患者miR-155表达增高,并随病程延长、HbA1c水平升高而表达明显增多。miR-155、NF-κB、sICAM-1的表达在血管病变组明显高于无血管病变组，在微血管病变并大血管病变组或大量白蛋白尿组，其升高更显著；多元逐步回归分析示 miR-155与 NF-κB、sICAM-1明显相关，均提示 miR-155可能参与了糖尿病血管病变的发生发展，miR-155与NF-κB、sICAM-1关系密切，炎症是糖尿病慢性血管病变发生发展的重要机制之一。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1对象和检测指标

2材料和仪器

3.实验方法及步骤

4统计学方法

结果

1. T2DM组与对照组各项指标比较

2. T2DM不同HbA1c、病程、血脂组miR-155、NF-κB、sICAM-1mRNA表达的比较

3. T2DM各组间上述三项表达的比较

4. miR-155相关性分析

讨论

1．miRNA-155与免疫、T2DM

2. miR-155与T2DM慢性血管病变

3.miR-155 与炎症及炎症因子NF-κB、sICAM-1的关系

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: miR-155与2型糖尿病血管病变发生机制的研究

致谢