孕酮通过孕酮受体调节脑外伤后血管生成促进脑外伤后大鼠神经修复

摘要

多年来研究者一直潜心寻找治疗颅脑创伤的有效药物，但一直未获理想结果，而孕酮是30年来首个获得 NIH巨资资助进行 TBI临床实验的药物，已经成为当今TBI研究新热点，而孕酮受体的主要研究也集中在下丘脑以及其在生殖功能方面的作用，在脑外伤后的作用鲜有研究报道，本研究主要目的是探索孕酮对于大鼠脑外伤后的神经保护作用，以及孕酮对脑外伤后脑水肿和血管生成作用的影响及其分子机制，以及孕酮受体在该过程中的作用。
　　研究内容：脑外伤后常常会伴有严重的脑水肿、神经功能恶化，本研究主要探索短期内对脑外伤大鼠进行孕酮干预，观察孕酮对于大鼠脑外伤后神经功能恢复情况，脑水肿情况，血管生成情况及相关蛋白DLL4/Notch1表达情况的影响，进一步，使用新型的孕酮受体调节剂ulipristal acetate(醋酸乌利司他，UPA)，阻断孕酮受体同时进行孕酮干预，进而探索孕酮受体在其中的作用。
　　研究方法:我们使用雄性Wistar大鼠作为实验动物，采用控制性大脑皮层损伤仪制作大鼠脑外伤模型，为了研究孕酮受体的作用，采用一种新型孕酮受体调节剂UPA阻断孕酮受体，从而研究其在孕酮作用中的角色。造模后随机分为以下3组，对照组：给予腹腔注射DMSO溶剂；孕酮组：给予腹腔注射孕酮；阻断剂组：同时给予腹腔注射孕酮和UPA；孕酮剂量16mg/kg，UPA剂量3mg/kg，均以22.5％DMSO作为溶剂，伤后6小时即给药，以后每24小时给药一次，伤后第3天作为观察点。脑外伤后大鼠的神经功能恢复评估采用改良的大鼠神经功能缺损量表（mNSS）进行评分，观察至伤后14天；使用干湿重法评估脑水肿情况；使用分光光度法测量伊文思蓝渗漏量评估血脑屏障功能；采用免疫凝胶电泳方法检测血管生成相关蛋白DLL4/Notch1的表达水平；使用免疫组织化学方法检测血管内皮标志物vWF和紧密连接蛋白Occludin的阳性率评估脑外伤后血管生成情况。
　　研究结果：孕酮能显著改善大鼠神经功能恢复，孕酮受体阻断之后，孕酮的改善神经功能恢复作用被显著减弱；孕酮减轻大鼠脑外伤后伊文思蓝渗漏量，减轻脑水肿程度，当孕酮受体被阻断后，孕酮的上述作用均被显著抑制；进一步，我们发现孕酮促进大鼠脑外伤后血管生成，以及促进血管生成相关蛋白DLL4/Notch1表达升高，孕酮受体阻断之后血管生成情况显著减弱，血管生成相关蛋白表达显著降低。
　　研究结论：综上实验结果，孕酮能促进大鼠脑外伤后神经功能恢复，减轻脑水肿，促进血管生成作用，这个过程可能是孕酮通过孕酮受体正向调控 DLL4/Notch1蛋白通路机制发挥作用的。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1 对象和方法

1.1 实验动物以及主要使用仪器

1.2 实验动物的饲养

1.3 大鼠脑外伤模型制作

1.4 实验分组

1.5 改良大鼠神经功能缺损评分量表

1.6 大脑水肿情况的检测

1.7 伊文思蓝（EB）渗漏

1.8 脑组织石蜡包埋和组织切片

1.9 免疫组织化学染色

1.10 蛋白质免疫印迹

1.11 统计学方法

2 结果

2.1孕酮能够改善脑外伤后神经功能恢复

2.2孕酮能减轻脑外伤后伊文思蓝从血脑屏障的渗漏，减轻脑水肿

2.3孕酮促进大鼠脑外伤后损伤灶周围血管生成

2.4孕酮促进大鼠脑外伤后DLL4和Notch1蛋白的表达

3讨论

3.1 大鼠脑外伤模型的建立

3.2 孕酮促进脑外伤后神经功能恢复作用

3.3 孕酮与血管生成的关系

3.4 孕酮受体在神经系统中的作用

3.5 孕酮对脑外伤后血脑屏障的作用

3.6 孕酮和孕酮受体以及下游蛋白在血管生成中的调控机制

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: 黄体酮对脑外伤大鼠的神经保护研究现状

致谢