放射治疗联合常山酮诱导小鼠移植瘤模型旁观者效应及机制研究

摘要

目的：探讨常山酮联合放射治疗对小鼠移植瘤旁观者效应及免疫微环境的影响，并探索其可能的分子机制。
　　方法：将60只健康雌性C57BL/6J小鼠随机分为2群，一群30只用于小鼠免疫微环境的检测，另一群30只用于旁观者效应的观察。将Lewis肺癌细胞分别接种于两群小鼠右后肢皮下，第一群小鼠于接种后7天进行实验。第二群小鼠于右后肢皮下接种2天后，再次于左后肢皮下接种同样数量的Lewis肺癌细胞。将两群小鼠每组再随机分为空白对照组（NC）、常山酮组（HF）、放疗组（RT）、放疗联合常山酮组（RT+HF）及放疗联合TGF-β抑制剂组（RT+SB）。空白对照组不放疗，不给药；常山酮组于接种后第7天至第15天予常山酮腹腔注射给药，每只鼠2ug／0.1ml/d；放疗组在接种后第8天、9天给予右腿移植瘤10Gy×2次照射；放疗联合常山酮组给药及放射处理同常山酮组及放疗组；放疗联合TGF-β抑制剂组处理同放疗联合常山酮组，但将常山酮换成 SB431542，每只鼠0.1ml/d。放射治疗后第7天，收获小鼠肿瘤组织及脾脏组织，将肿瘤组织及脾脏组织研磨制备单细胞悬液后，用PMA、Ionomycin及GolgiPlug蛋白转运抑制剂刺激3-5小时后，经表面染色、破膜固定及核内染色后，上机行FACS检测肿瘤组织及脾脏组织中 CD8+T细胞含量并计算激活比。放射治疗后第10天，收获小鼠肿瘤组织及脾脏组织，将肿瘤组织及脾脏组织研磨制备单细胞悬液后，经表面染色，上机行FACS检测肿瘤组织及脾脏组织中CD11b+Gr-1+MDSC细胞含量。另一群双腿种瘤的小鼠，自成瘤之日起，仔细触及肿瘤结节生长情况，每隔3日测量并记录左腿、右腿皮下移植瘤的长、短径，再用公式演算确定移植瘤体积。发现小鼠死亡，应同时计算存活时间。
　　结果：流式结果显示：本研究中空白对照组、常山酮组及放疗组小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中MDSC含量无明显差异，放疗联合常山酮组及放疗联合TGF-β抑制剂组小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中MDSC含量无明显差异，但均有趋势低于放疗组。空白对照组、常山酮组及放疗组小鼠脾脏淋巴细胞MDSC含量无明显差异，放疗联合常山酮组及放疗联合TGF-β抑制剂组小鼠脾脏淋巴细胞MDSC含量无明显差异（P=0.711），但均有趋势低于放疗组，且放疗联合常山酮组较放疗组达到统计学差异（P=0.039）。小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中各组总细胞毒性T淋巴细胞及激活的细胞毒性 T淋巴细胞的数量及比例均无明显差异。在小鼠脾脏淋巴细胞中，常山酮组及放疗组小鼠总细胞毒性T淋巴细胞含量均高于空白对照组，而放疗联合常山酮组及放疗联合TGF-β抑制剂组小鼠总细胞毒性T淋巴细胞含量均高于常山酮组及放疗组。旁观者效应发现，对于右腿受到照射的移植瘤，放射治疗前各组小鼠肿瘤体积无统计学差异（P=0.331）。放射治疗结束后第4天，放疗组、放疗联合常山酮组及放疗联合TGF-β抑制剂组肿瘤体积开始小于空白对照组(P值分别=0.016、0.007、0.000)及常山酮组（P分别=0.027、0.002、0.001），放疗组、放疗联合常山酮组及放疗联合TGF-β抑制剂组组肿瘤体积无统计学差异（P值均＞0.05）。放射治疗结束后第10天，放疗联合常山酮组肿瘤体积开始小于放疗组(P=0.046)。放射治疗结束后第14天，放疗联合 TGF-β抑制剂组肿瘤体积开始小于放疗组（P=0.017）。治疗过程中各时间点放疗联合常山酮组及放疗联合TGF-β抑制剂组肿瘤体积均无明显差异（P值均＞0.05）。对于左腿未经照射的移植瘤，放射治疗前各组小鼠肿瘤体积无统计学差异（P=0.957）。放射治疗后第7天，放射治疗联合常山酮组小鼠肿瘤体积较单纯常山酮组有明显减小（P=0.04）。放射治疗后第10天，放射治疗联合常山酮组小鼠肿瘤体积较空白对照组及单纯放射治疗组有明显减小（ P分别=0.031、0.038）。治疗结束后，放射治疗联合常山酮组6只小鼠中有2只左腿未受照射的肿瘤完全消退。直至观察终止时，放疗联合常山酮组仍有2只小鼠存活。
　　结论：放射治疗联合常山酮能够增强Lewis肺癌移植瘤模型治疗疗效，并产生旁观者效应，其主要的机制可能是由于常山酮抑制放射治疗所激活的TGF-β传导通路，并进一步作用于机体免疫微环境。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1.1材料与仪器

1.2 实验方法

结果

2.1常山酮药物毒性观察结果

2.2各组小鼠肿瘤组织及脾脏淋巴细胞中MDSC细胞含量

2.3 各组小鼠肿瘤组织及脾脏淋巴细胞中CD8+T细胞含量

2.4旁观者效应中各组小鼠左右腿肿瘤生长抑制情况

2.5各组小鼠生存情况

讨论

3.1 放射治疗联合常山酮对小鼠移植瘤及生存期的影响

3.2 放射治疗联合常山酮对TGF-β信号通路的影响

3.3 放疗联合常山酮对小鼠免疫微环境的影响

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:TGF-β与肿瘤预后相关性的基础与临床研究进展

致谢

个人简历