抑制中心体相关蛋白TACC3表达对膀胱尿路上皮癌T24细胞周期的影响

摘要

目的：
　　探讨中心体相关转录相关酸性卷曲蛋白3（TACC3）在膀胱癌T24细胞系中的表达情况，并探讨抑制中心体相关蛋白TACC3在膀胱尿路上皮癌T24细胞系中的表达水平对细胞周期的影响及相关周期蛋白的变化，初步探讨TACC3影响细胞周期变化的基本分子机制，为临床膀胱癌的诊疗与预后提供相关的参考信息。
　　方法：
　　Western blot半定量实验方法检测 T24细胞系及膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1细胞系中TACC3蛋白的表达情况；转染特异性TACC3-shRNA相关质粒下调TACC3蛋白表达水平并验证其转染效果；流式细胞技术检测抑制TACC3蛋白表达后，膀胱癌T24细胞系细胞周期的变化，同时检测被阻滞位点周期相蛋白蛋白量的表达水平，初步探讨TACC3影响膀胱癌T24细胞系细胞周期的基本分子机制。
　　结果：
　　实验结果发现TACC3蛋白水平在膀胱尿路上皮癌T24细胞中高表达，Western Blot结果灰度扫描表明：两组灰度值（0.30±0.03、0.85±0.07）。差异明显符合统计学要求（P＜0.05）。在Hela细胞中应用荧光定量PCR（qPCR）技术初步验证4个靶点的干扰效率，获得了对 TACC3干扰效率达到92.6%的pYr-LVX-TACC3-shRNA质粒（即shRNA4）；下调TACC3蛋白表达水平后，流式细胞技术结果显示，shRNA组细胞周期被阻滞在G1期，与Untreated组和Negative control组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）；Western Blot检测G1期相关周期蛋白表达水平结果显示，CDK4、CDK6及CyclinD1的表达均受到抑制，与Untreated组和Negative control组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）；在探讨TACC3影响膀胱癌T24细胞系细胞周期的基本分子机制时。p53蛋白是细胞增殖和分化的重要调节因子，文献表明探索p53上游通路p38（细胞分裂素活化蛋白激酶）作为一个对G1期停滞的重要贡献者介导了相关应激反应。TACC3蛋白水平的抑制导致p53蛋白水平增加，同样的现象也发生在p21和p38蛋白上。我们发现TACC3蛋白表达的抑制激活了p38，从而使p53和p21的水平增加，与Untreated组和Negative control组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。进一步研究发现，特异性抑制p38表达后，由TACC3蛋白表达的抑制诱导的细胞G1期阻滞被释放且与shRNA组比较差异具有统计学意义，同时我们发现，p53及p21蛋白的表达也受到抑制。
　　结论：
　　TACC3在膀胱尿路上皮癌 T24细胞系中高表达，转染重组质粒（pYr-LVX-TACC3-shRNA4）下调TACC3蛋白的表达后，膀胱尿路上皮癌T24细胞系被阻滞在G1期且G1期相关周期蛋白CDK4、CDK6及CyclinD1的表达均受到抑制，进一步研究结果提示TACC3蛋白表达的抑制激活了p38，从而使p53和p21的水平增加，我们猜测TACC3的抑制通过p38–p53–p21应激信号通路诱导G1期阻滞。

目录

声明

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1.1研究对象

1.2实验试剂及相关材料：

1.3 主要仪器和设备：

1.4 试验方法：

结果

2.1膀胱尿路上皮癌T24细胞系中TACC3蛋白量的表达水平明显增高

2.2 针对人 TACC3 基因（ NM_006342 ）的 shRNA 表达载体 pLV-TACC3-sh1、pLV-TACC3-sh2、pLV-TACC3-sh3、pLV-TACC3-sh4购自长沙赢润生物技术有限公司。相关表达序列如：

2.3 Q-PCR检测四组shRNA表达载体对TACC3的mRNA表达情况

2.4 pYr-LVX-TACC3-shRNA转染效率的验证

2.5流式细胞技术检测Untreated组、Negative control组及shRNA组细胞周期变化情况。

2.6 shRNA组对G1期相关细胞周期蛋白及细胞周期蛋白依赖性激酶表达情况。

2.7 TACC3影响膀胱癌T24细胞周期相关通路的初步研究。

讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:膀胱癌的生物标志物及靶向治疗

致谢

个人简历