丹参药材指纹图谱及其水溶性成分的定量研究

摘要

随着中药事业及相关学科的发展,中药质量控制正从简单的单个成分含量测定转向以先进技术为手段,多组分、多指标含量的测定.建立在现代分析技术基础之上的指纹图谱技术己成为中药材及中药制剂质量控制的主要发展方向.高效液相色谱.紫外检测器法作为建立中药指纹图谱的常用方法,虽可控制药物质量,但仍存在灵敏度不够高,无法解决共淋洗峰(相同保留时间被洗脱的峰)等问题. 高效液相色谱.库仑阵列电化学检测器(HPLC-CEAD)法可弥补这些不足,且其用于构建中药材丹参的指纹图谱目前尚未见报道. 本文采用HPLC-CEAD法首先对产于河北的丹参药材中四种水溶性成分(丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛和丹酚酸B)进行定量检测.选用Hypersil C<,18>(5μm,250×4.6mm)色谱柱；流动相由A(50mM醋酸钠-0.1﹪三氟乙酸,pH2.5)、B(乙腈)两相组成,采用梯度洗脱:0～15min,6﹪B:15～45min,6～22﹪B；0.8mL/min； 检测电势为100mV,150mV,200mV和250mV.结果显示,标准曲线线性关系良好,回收率均高于97﹪,日内、日间测得结果的相对标准偏差(RSD)均低于6.6﹪.证明该方法用于丹参多种水溶性成分的同时测定精密度高,重复性好. 其次采用HPLC-CEAD法对山东、河北等产地的丹参药材指纹图谱进行研究,并且分析比较不同产地丹参药材的指纹图谱.供试品溶液制备采用加热回流的方法,以70﹪甲醇为溶剂,回流2h提取丹参药材中的主要成分.所用色谱柱同上；流动相由A(50mM醋酸钠-0.1﹪三氟乙酸,pH 2.7)、B(乙腈)两相组成,采用梯度洗脱:0～15min,6﹪B；15～45min,6～20﹪B:45～60min,20～53﹪B:60～120min,53﹪B；0.8mL/min；工作电势为-600mV,100mV,250mV和500mV.方法学验证结果显示,精密度、稳定性及重复性实验中各物质相对保留时间和相对峰面积的RSD值均低于3.0﹪,参考国家药品监督管理局制定的《中药注射剂指纹图谱的技术要求》,符合有关规定.采用此方法共检测到25个共有指纹峰.研究结果表明,上述方法精密度高,稳定性好,重复性好,适用于丹参药材指纹图谱的建立.

目录

文摘

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前言

第一章文献综述

1.1中药材丹参及其主要成分简介

1.1.1丹参药材

1.1.2丹参药材主要成分及功能

1.2丹参药材中水溶性成分的定量测定

1.2.1测定方法

1.2.2分析方法的评价

1.3中药材丹参指纹图谱的建立

1.3.1建立指纹图谱的意义

1.3.2中药指纹图谱研究现状

1.3.3测定方法

1.4高效液相色谱法

1.4.1液相色谱检测器分类

1.4.2液相色谱电化学检测器

1.4.3 ESA库仑阵列电化学检测器

1.5指纹图谱的解析方法

1.5.1人工解析法

1.5.2聚类分析法

1.5.3人工神经网络法

1.5.4模糊数学法

1.6本文研究的主要内容

第二章丹参药材中四种水溶性成分的定量测定

2.1实验设备与材料

2.1.1仪器设备

2.1.2材料与试剂

2.2实验方法

2.2.1色谱分析条件的初步确立

2.2.2优化色谱条件的研究

2.2.3分析方法的方法学确证

2.2.4样品测定

2.3结果与讨论

2.3.1色谱条件的建立

2.3.2分析方法的确证

2.3.3丹参药材中水溶性成分的定量测定

2.4小结

第三章丹参药材指纹图谱的建立

3.1实验设备与材料

3.1.1仪器设备

3.2.1材料与试剂

3.2实验方法

3.2.1色谱分析条件的初步建立

3.2.2色谱条件的优化

3.2.3提取条件的优化研究

3.2.4方法学确证

3.2.5丹参药材指纹图谱的建立

3.3结果与讨论

3.3.1色谱条件的建立

3.3.2提取条件的确定

3.3.3方法学确证

3.3.4丹参药材指纹图谱的建立

3.3.5不同产地丹参药材的指纹图谱

3.4小结

第四章结论与展望

4.1结论

4.2展望

参考文献

发表论文和科研情况说明

附 录 中药注射剂指纹图谱研究的技术要求

致 谢