TBP相关因子3（TRF3）在小鼠早期胚胎和细胞系中的表达及功能分析

摘要

TBP是通用转录因子中最重要的一员，参与三种类型的RNA聚合酶负责的转录。TRF3是TBP家族的新成员，也是与TBP同源性最高的一个。TRF3是非洲爪蟾和斑马鱼早期胚胎发育所必需的。本课题中我们采用免疫组化、western、GFP融和蛋白和ChIP等方法对TRF3在小鼠早期胚胎和细胞系中的表达、定位和功能进行了分析。 总体上看，卵母细胞成熟和植入前胚胎发育过程中TRF3具有与TBP共表达的模式，并且两因子的胞内定位及含量变化与胚胎基因转录水平的动态变化密切相关。但是在1-细胞胚胎晚期，TRF3进入原核的时间比TBP晚4小时左右。另外，两因子选择性的结合在ES细胞中不同基因的启动子上。结果表明TRF3可能在小鼠早期胚胎发育过程中发挥作用，而且TBP和TRF3对不同基因的转录调节上存在着协调和分工。 有丝分裂过程中，TRF3也具有与TBP类似的动态变化：中期时大部分从浓缩的染色体上脱离后弥散在胞质，但仍有少部分紧密结合在浓缩的染色体上，提示TRF3可能参与有丝分裂”分子标签”的形成。末期两因子进入子细胞核内，但TRF3进核时间晚于TBP及其它通用转录因子。另外，采用改良的方法，我们观察到了TRF3在多种细胞核仁中呈彼此分离的点状分布，而且与PolⅠ和UBF共定位。因此，TRF3除了参与PolⅡ负责的转录外，可能还参与PolⅠ负责的转录。

目录

一、前言

二、实验材料及方法

1.实验材料

2.实验仪器

3.试剂的配制

4.实验方法

三、实验结果

第一部分TRF3在小鼠早期胚胎中的表达及功能分析

1.抗TRF3抗体的效价及特异性检测

2.TRF3和TBP在卵母细胞成熟过程中的表达

3.TRF3和TBP在植入前胚胎中的表达

4.TRF3和TBP与启动子的结合

第二部分TRF3在细胞周期中的动态变化及在核仁内的定位

1.有丝分裂中期大部分TRF3和TBP从浓缩的染色体上脱离进入胞质

2.有丝分裂末期TRF3进核时间比TBP晚

3.GFP-TBP和GFP-TRF3结合在中期染色体上

4.TRF3在核仁中呈点状分布

四、讨论

结论

参考文献

英文缩写

图表目录

攻读博士学位期间的研究成果

致谢

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