牛泡沫病毒四种borf1转录本功能研究

摘要

牛泡沫病毒(BovineFoamyVirus)属反转录病毒科泡沫病毒亚科泡沫病毒属。该病毒基因组成分、生活周期及基因调控方式与传统的反转录病毒区别较大。它的基因转录至少需要两个启动子协同完成，其中5'LTR起始结构基因的转录，内部启动子(IP)则控制Borf1等非结构蛋白的合成，两类启动子的活性都依赖于反式激活因子Borf1(即Tas)。 本文以实验室分离并鉴定的BFV3026中国毒株为材料，通过克隆BFV四种borf1转录本，模拟其在感染状态下的存在形式，并对其功能进行初步探讨。 利用PCR方法构建去除CMV启动子下游转录起始位点的真核表达载体及一系列borf1转录本真核表达质粒后，以RT-PCR和WesternBlot验证表达质粒的正确性。同时通过选取不同的特异性PCR扩增引物、SouthernBlot和测序方法发现起始于IP的不拼接转录本在细胞内可发生剪切，产生起始于IP的拼接转录本。采用细胞核浆分离的方法，证明不拼接转录本一部分经剪切后生成拼接转录本，另一部分仍以不拼接形式被运输出细胞核。瞬时表达分析表明IP拼接转录本在对报告质粒BFVIP-luc和LTR-luc的激活方面要高于LTR拼接转录本，并且两者都高于正对照。对mRNA出核和亚细胞定位的研究表明，拼接转录本在mRNA出核效率方面高于不拼接转录本。 本文的实验结果希望能够对随后从翻译水平上继续研究四种borf1主要转录本功能以及对BFVBorf1转录后调控机制的研究提供一定的实验基础。

目录

文摘

英文文摘

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第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果与分析

第四章讨论

第五章小结

参考文献

本文中用到的主要缩写

个人简历及在学期间发表的论文与研究成果

致谢