去除免疫主导性表位的痘苗病毒载体的构建与相应重组疫苗的特性分析

摘要

在疫苗研究工作中，疫苗病毒(vaccinia virus，VACV)是一种非常重要的疫苗载体，但是一直以来却鲜有以VACV为载体的成功的疫苗案例的报道。
　　 这主要归因于VACV庞大的基因组表达大量的抗原，这些抗原又对应上千种抗原表位，在以VACV为载体的重组疫苗中，受到免疫主导性的影响，宿主机体对VACV本身抗原的免疫反应在很大程度上干扰了对外源抗原的免疫应答反应及免疫记忆作用。
　　 本实验室前期研究数据表明，以野生型VACV为载体，导入外源抗原OVA编码基因之后，尽管OVA本身编码的蛋白是一种免疫原性很强的抗原，但是由于VACV本身的抗原影响，导致机体对OVA抗原的呈递受到很大程度的限制，VACV本身抗原B8R所诱导产生的CTL效应甚至强于OVA。
　　 基于这些数据，我们构建了去除B8R或A47L的重组VACV-WR(VACV-WR-△B8R和VACV-WR-△A47L)，并在此基础上构建了以去除主导性表位的VACV-WR-△B8R和VACV-WR-△A47L为载体导入OVA编码基因的重组病毒，对这些去除单一抗原的载体特性进行了实验测定。
　　 研究结果表明，在去除抗原表位B8R或A47L后，外源抗原OVA能够诱导机体产生强于野生型病毒载体中OVA所能诱导产生的CTL效应，但是我们同时发现，这种增强只是停留在很小的比例，在外源抗原CTL效应增强的同时，我们检测到VACV-WR原有抗原表位所诱导产生的CTL效应也得到了增强。我们分析很可能是由于VACV-WR表位之间存在很大程度上的竞争关系，这使得在去除单一表位之后，由于竞争因素的减少，各表位CTL效应都得到了增强。与此同时，我们还注意到，在B8R表位去除的重组病毒中，外源蛋白OVA在免疫梯度中成为主导性最强的表位，超过了VACV-WR本身原有的任何单一表位，居于免疫梯度首位。基于这一结果，我们提出假设通过去除多个表位使这种竞争关系进一步降低，能够使OVA编码的蛋白CTL反应进一步增强。
　　 进一步的免疫记忆效应检测，我们发现通过去除VACV主导性表位在能够增强外源基因OVA编码的蛋白CTL反应的情况下，不会影响到重组病毒引起机体的免疫记忆效应。