调节性B细胞在胃癌患者外周血中的表达及对T细胞抗肿瘤免疫效应的影响

摘要

研究背景：传统的胃癌治疗方法仅注重了手术和放化疗对肿瘤的清除，却忽视了对患者免疫功能状态的评估和调整。已知胃癌患者存在抗肿瘤免疫功能不足，研究免疫抑制机制对修复与重建患者免疫功能具有重要意义。调节性T细胞（Tregs）是胃癌患者免疫抑制的重要因素。近年来发现机体还存在另一重要的免疫抑制细胞——调节性B细胞(Bregs)，然而尚没有Bregs与肿瘤免疫相关的直接研究。
　　 目的：本研究首次观察胃癌患者外周血Bregs的表达情况，并探讨Bregs对T细胞抗肿瘤效应的影响。
　　 方法：1）选取胃癌患者30例，健康对照组25例，以流式细胞术检测外周血中CD19+IL-10+Bregs比例；2）通过CD19磁珠分离纯化B细胞并体外培养，以基础条件CD40mAb+IL-2+IL-4为对照组，分别加LPS、CPG、CPG+Poly(i:c)（C+P组）及BAFF为不同处理组，72h后流式细胞术检测Bregs比例，ELISA法检测上清中IL-10及TGF-β含量；3）选取不同处理组中Bregs比例最高与最低的两组B细胞，用BGC-823全细胞裂解物抗原冲击后与富集的T细胞(去除B细胞及贴壁细胞的PBMC)共培养72h;设无B细胞共培养组为对照组：4）流式细胞术检测共培养后细胞的表型(CD3、CD8、Tregs)；通过ELISA检测共培养细胞上清中IFN-Υ含量；LDH释放法检测共培养后细胞对BGC-823肿瘤细胞的杀伤能力。
　　 结果：1）胃癌患者外周血中Bregs比例显著高于对照组，Ⅲ-Ⅳ期患者Bregs比例高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05)，Ⅰ-Ⅱ期与健康对照组无明显差别(P>0.05)；2)B细胞不同条件体外扩增后Bregs比例不同，从高到低分别为：CPG组>基础条件组>C+P组>BAFF组>LPS组，与基础条件组比较，除CPG组外均有统计学差异(P<0.05)；3)B细胞培养72h后上清中各组TGF-β含量差异不明显，而IL-10的含量CPG组明显高于基础条件组(P<0.05)，其余各组间差异不明显；4）高比例Bregs组共培养上清中IFN-Υ显著低于低比例Bregs组(P<0.01)和对照组(P<0.05)；各组CD8+T细胞及Tregs比例无明显差异；5）高比例Bregs组杀伤能力显著低于低比例Bregs组(P<0.01)和对照组(P<0.05)。
　　 结论：1）胃癌患者外周血Bregs与健康人相比明显升高，晚期患者显著高于早期患者，说明Bregs很可能参与了胃癌患者肿瘤免疫的抑制效应；2）体外培养条件下单CD40信号激活会产生高水平的Bregs，而辅以合适的其它信号可以降低Bregs比例，这对于B细胞相关免疫治疗有重要意义；3）B细胞群体中Bregs比例升高会明显抑制T细胞抗肿瘤免疫效应，提示去除Bregs很可能会增强抗肿瘤免疫。