川西北九眼独活野生资源遗传多样性研究

摘要

九眼独活药用始于明代，在我国有着悠久的药用历史，四川九眼独活资源丰富，应用广泛，但由于长期的采挖，九眼独活的野生资源同渐匮乏，正面临着生存危机。本试验主要进行了野外资源收集与资源圃的建立、植物生长性状观察、有效成分含量测定、遗传多样性分析4个方面的研究。旨在为这一野生资源鉴定、保护和合理利用提供相关的科学依据。所得结果如下：
　　 1.于四川西北地区四个县搜集了110株野生九眼独活，建立了资源圃，进行人工栽培。
　　 2.对搜集的资源进行有效成分的含量测定。移栽后的九眼独活总香豆素和总皂苷含量均不同程度的下降。
　　 3.进行了九眼独活生长发育研究。
　　 4.摸索出有效的九眼独活基因组DNA提取方法。
　　 5.建立了九眼独活ISSR反应体系。25μLISSR-PCR体系为：模板30ng，Mg2+3.5mmol/L,dNTP0.6mmol/L，引物0.4μmol/L,Taq酶1U。
　　 6.对九眼独活群体内和群体间的遗传多样性进行了比较分析。
　　 7.提出了九眼独活遗传资源保护和利用的建议。

目录

文摘

英文文摘

1 绪论

1.1 遗传多样行研究

1.2 药用植物的种质资源研究

1.3 植物遗传标记技术研究

1.3.1 遗传标记的类型

1.3.2 分子标记的分类

1.3.3 ISSR标记技术

1.4 九眼独活及其研究

1.5 本研究的目的和意义

2 材料与方法

2.1 川西北野生九眼独活资源的收集及资源圃的建立

2.1.1 川西北野生九眼独活资源的收集

2.1.2 资源圃的建立

2.2 九眼独活的发育生物学研究

2.3 九眼独活的生物化学研究

2.3.1 九眼独活中总香豆素的含量测定

2.3.2 九眼独活中总皂苷的含量测定

2.3.2 九眼独活中秦皮乙素的含量测定

2.3.4 九眼独活中东莨菪内酯的含量测定

2.4 九眼独活的遗传多样性研究

2.4.1 DNA提取

2.4.2 九眼独活ISSR扩增条件的优化

2.4.3 引物的筛选

2.4.4 PCR扩增及电泳检测

2.4.5 数据统计与分析

3 结果与分析

3.1 九眼独活的植株性状观测

3.2 九眼独活的有效成分测定

3.2.1 九眼独活中总香豆素的含量测定

3.2.2 九眼独活中总皂苷的含量测定

3.2.3 九眼独活中秦皮乙素的含量测定

3.2.4 九眼独活中东莨菪内酯的含量测定

3.3 九眼独活的遗传多样性分析

3.3.1 基因组DNA的提取与检测

3.3.2 九眼独活ISSR-PCR扩增条件的优化

3.3.3 引物的筛选

3.3.4 PCR扩增

3.3.5 九眼独活ISSR-PCR扩增产物的多态性

3.3.6 九眼独活的ISSR聚类分析

4 讨论

4.1 九眼独活野生资源的性状

4.2 九眼独活的有效成分

4.3 九眼独活的DNA提取与ISSR反应体系建立

4.4 九眼独活的遗传多样性

5 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

附表1 根据ISSR分析得到的60株九眼独活品种间的遗传相试系数

攻读学位期间发表的与学位论文相关学术论文及研究工作