糖对铁皮石斛愈伤组织生长及其生化特性的影响

摘要

本文以铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl)原球茎为外植体诱导出的愈伤组织在黑暗中继代培养2次后的胚性愈伤组织为实验材料，研究各种糖对愈伤组织生长及生化特性的影响。主要结果如下： 1.以继代2次的胚性愈伤组织为材料，研究了蔗糖、果糖、海藻糖、麦芽糖和乳糖对愈伤组织生长的影响。结果表明：蔗糖、果糖、海藻糖有利于愈伤组织的生长，它们的最适浓度分别为3％、2％、3％；麦芽糖次之，其最适浓度为2％；乳糖最不利于愈伤组织生长，其最适浓度为0.5％；果糖和蔗糖对愈伤组织生长的作用启动时间较早，而海藻糖则较晚，海藻糖和果糖对愈伤组织生长的作用持续时间较长，而乳糖、蔗糖和麦芽糖的作用持续时间则较短；各种糖对愈伤组织增殖速度的影响几乎都是先上升到一个顶峰，然后再下降，即在较低浓度时愈伤组织生长缓慢，而在较高浓度则又抑制愈伤组织的生长。 2.在以上基础之上，研究了海藻糖、蔗糖和乳糖对愈伤组织内可溶性糖含量的影响。结果表明：用3种糖培养的愈伤组织内的可溶性糖含量都随培养基中糖浓度的增加而增加，培养在3种糖的培养基上的愈伤组织都有一个体内、体外糖趋于平衡的浓度，分别为6％、3％、0.5％，在蔗糖和乳糖培养基上生长的愈伤组织体内外糖趋于平衡的浓度与愈伤组织生长的最适浓度刚好一致，而在海藻糖培养基上生长的愈伤组织的这两种浓度并不一致。 3.研究了当海藻糖、蔗糖、乳糖在愈伤组织生长速度达最大时，对愈伤组织中三种同工酶EST、SOD、AMY的影响。结果如下：除在乳糖培养基上的愈伤组织中EST同工酶无明显差别外，在蔗糖和海藻糖培养基上都有较大变化，在糖浓度较高时都有新酶带的出现，说明可能有新的基因表达，并在浓度分别为5％和9％时酶带都较深，但在浓度都为3％时酶带都较浅，这与前面的愈伤组织增殖最适浓度和体内、外糖达平衡的浓度都相一致；在3种糖培养基上的愈伤组织的SOD酶谱中，在高浓度时，都会有新酶带的出现，而在3个对照中，随着时间的增加，SOD酶带逐渐减少：3种糖浓度较高时，淀粉酶的酶带都较深，可溶性糖含量也都很高；3个对照的淀粉酶的酶带也较深，并随时间的增加，淀粉酶的酶带也随之加深，而且可溶性糖含量越来越少。 本文得出了有利于铁皮石斛愈伤组织生长的糖类及其最适浓度，研究了3种糖对愈伤组织内可溶性糖含量的变化，并通过对3种糖培养的愈伤组织EST、SOD、AMY同工酶的分析，表明培养基中的糖可以对胚性愈伤组织发育过程中的基因表达进行调控。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略表

声明

第1章绪论

1.1用于植物组织培养的糖类

1.2糖源对植物组织培养的影响

1.2.1糖的种类对植物组织培养的影响

1.2.2糖的浓度对植物组织培养的影响

1.3糖源对植物体内含物的影响

1.4糖作为一种信号分子

1.4.1己糖激酶

1.4.2植物体中的糖信号系统

1.4.3糖对基因的表达调控

1.4.4糖与植物激素信号之间的关系

1.4.5糖与氮信号之间的关系

第2章糖对铁皮石斛胚性愈伤组织生长与增殖的影响

2.1实验材料

2.2实验方法

2.2.1培养基的制备

2.2.2愈伤组织的诱导和继代培养

2.2.3糖对愈伤组织的分化培养

2.2.4数据分析

2.3结果

2.3.1糖对铁皮石斛愈伤组织生长的影响

2.3.2糖对铁皮石斛愈伤组织生长速率的影响

2.4讨论

第3章糖对铁皮石斛愈伤组织可溶性糖含量的影响

3.1材料与方法

3.1.1实验材料

3.1.2可溶性糖的提取

3.1.3可溶性糖含量的测定

3.1.4可溶性糖含量的计算

3.2实验结果

3.2.1海藻糖对铁皮石斛愈伤组织可溶性糖含量的影响

3.2.2蔗糖对铁皮石斛愈伤组织可溶性糖含量的影响

3.2.3乳糖对铁皮石斛愈伤组织可溶性糖含量的影响

3.3讨论

第4章糖对愈伤组织同工酶的影响

4.1材料与方法

4.1.1溶液的配制

4.1.2实验材料

4.1.3粗酶液的提取

4.1.4凝胶电泳

4.1.5凝胶染色

4.2实验结果

4.2.1 3种糖培养的愈伤组织的酯酶同工酶酶谱分析

4.2.2 3种糖培养的愈伤组织的超氧化物歧化酶同工酶酶谱分析

4.2.3 3种糖培养的愈伤组织的淀粉酶同工酶酶谱分析

4.3讨论

结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士阶段的科研成果