不同宿主足螨的形态学观察及ITS-2基因序列分析研究

摘要

足螨属于痒螨科(Psoroptidae)、足螨属(Chorioptes)，是一种呈世界性分布的感染家畜及野生动物的体外寄生虫。目前，多数学者认为足螨属的螨可以分为牛足螨(Chorioptes bovis)和德州足螨(Chorioptes texanus)两个种，但是一部分学者对此分类方法提出了质疑，他们认为此分类方法仅仅依据了足螨的形态学和生物学方面的特征，而没有考虑到遗传学方面的因素。此外，由于对寄生于一些动物的足螨的研究还不够深入，如大熊猫足螨(C.panda，Fain andLeclerc,1975)、羚羊足螨(C.crewei，Lavoipierre,1958)以及獾足螨(C.mydaus，Fain，1975)等，这些足螨究竟是牛足螨与德州足螨的同种异名还是独立种还有待进一步的研究证实。 本试验以采自四川双流黄牛的足螨，洪雅西门达尔奶牛、黑白花奶牛、蒙贝利亚奶牛的足螨以及成都大熊猫繁育研究基地的大熊猫的足螨为试验材料，首先对采自黄牛和大熊猫的足螨进行形态学观察，再将寄生于上述五种动物的足螨ITS-2基因进行克隆和序列分析。采用光镜和扫描电镜进行形态学观察，结果表明：两种足螨的雄螨体末突出物均由大小两节组成，突出物上竹片状刚毛和最外侧刚毛的长度分别介于168μm-255μm和43μm-80μm之间，与德州足螨基本相同，而其中寄生于大熊猫的足螨比寄生与黄牛的足螨虫体大。采用PCR方法成功扩增出上述五种足螨的ITS-2基因全序列，在Genbank上的注册号分别为：寄生于西门达尔奶牛的足螨(EF053119)、寄生于黄牛的足螨(EF053121)、寄生于黑白花奶牛的足螨(EF053120)、寄生于蒙贝利亚奶牛的足螨(EF053122)、寄生于大熊猫的足螨(EF053123)，分析结果显示：采自大熊猫的足螨ITS-2基因全序列长度为232bp，比Genbank上注册的德州足螨(AF123082)、牛足螨(AF123081)ITS-2基因全序列略长，与之的同源性分别为85.6％和90.4％。其余四种足螨的ITS-2基因中，采自西门达尔奶牛的足螨ITS-2基因全序列为 228bp，与德州足螨的ITS-2基因全序列长度相同，其余3种足螨的ITS-2基因长度为225bp，与牛足螨的ITS-2基因长度相同。但以上4种足螨的ITS-2基因与德州足螨 ITS-2 基因同源性较高，介于94.2％-97.8％之间，而与牛足螨ITS-2基因的同源性较低，仅在84.3％-87.0％之间。 除上述5种足螨的ITS-2基因以外，还选用痒螨科(Psoroptidae)痒螨属(Psoroptes)的兔痒螨(Psoroptes cuniculi)ITS-2基因(AB105201)作为外群，加上Genbank上公布痒螨科足螨属的德州足螨分离株ITS-2基因和牛足螨分离株ITS-2 基因的序列构建 ITS-2 基因的各种系统树。从构建的系统树分析：寄生于大熊猫的足螨与牛足螨、德州足螨的亲缘关系均较远，其余四种足螨与德州足螨的亲缘关系较近。 根据形态学和ITS-2基因序列分析结果综合分析得出：寄生于大熊猫的熊猫足螨(C.panda)是不同于德州足螨及牛足螨的另一个种，应为足螨属中的一个独立有效种；寄生于四种牛的足螨属于德州足螨。

目录

声明

摘要

1文献综述

1.1足螨的形态特征、形态学与生物学分类研究

1.1.1足螨的形态学特征

1.1.2足螨的形态学及生物学分类研究

1.2分子系统学研究进展

1.2.1分子系统学的概念及发展简史

1.2.2分子系统学的发展趋势

1.3 DNA序列分析在螨类分类学上的研究

1.3.1核糖体DNA转录区的研究

1.3.2核糖体DNA内部转录间隔区(ITS)的研究

1.4展望

1.5本试验的目的和意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.2试验方法

2.3足螨的形态学观察

2.3.1试验材料与主要试剂

2.3.2试验方法

2.4足螨ITS-2基因克隆测序及序列分析

2.4.1试验材料与主要试剂

2.4.2试验方法

2.4.3足螨中国分离株ITS-2基因同源性分析和系统树构建

3试验结果

3.1形态学观察

3.1.1寄生于黄牛的足螨形态学观察结果

3.1.2寄生于熊猫的足螨形态学观察结果

图版

3.2ITS-2基因克隆及序列分析

3.2.1 PCR扩增结果

3.2.2 ITS-2基因克隆及阳性重组质粒的鉴定

3.2.3测序结果及数据处理

3.2.4足螨ITS-2基因序列系统树构建结果和分析

4分析与讨论

4.1形态学

4.1.1与德州足螨的形态学比较

4.1.2与牛足螨的形态学比较

4.1.3本次试验观测与以往报道的寄生于大熊猫的足螨的形态学比较

4.1.4本次试验观测的两种足螨之间的形态学对比

4.2ITS-2基因克隆测序

4.2.1 ITS-2基因的选择

4.2.2 ITS-2基因同源性分析

4.2.3本试验足螨的分子系统学分析

5结论

参考文献

致谢