蛋氨酸来源和水平对产蛋鸡肝脏蛋氨酸及脂质代谢的影响

摘要

本研究通过四个试验评价了蛋氨酸来源和添加水平对产蛋鸡肝脏蛋氨酸及脂质代谢的影响。
　　试验一 蛋氨酸来源和添加水平对肉种鸡肝脏蛋氨酸及脂质代谢的影响
　　本试验研究了蛋氨酸来源和添加水平对肉种鸡肝脏蛋氨酸代谢及脂质代谢的影响。采用2×6+1因子完全随机试验设计，2种蛋氨酸来源包括DL-2-羟基-4-甲硫基丁酸(DL-2-hydroxyl-4-methylthio-butiric acid，HMTBA)和DL-蛋氨酸(DL-methionine，DLM)和6个蛋氨酸添加水平（0.05％、0.10％、0.15％、0.20％、0.25％和1.00％），另设置一个不添加蛋氨酸的基础饲粮对照组，共13个处理，每个处理8个重复，共2184只大恒699肉种鸡（30周龄）。
　　蛋氨酸来源和添加水平对肉种鸡肝脏ACC、FAS、DAGT2及LPL基因的表达无显著影响（P＞0.10）。随饲粮HMTBA添加水平的增加，MAT2A(P=0.06)和ADA(P=0.07)有一次线性增加的趋势。MSR(P=0.09)、MS(P=0.02)、ADA（P=0.08）、SAHH(P=0.08)和MAT2A（P=0.06）的表达量随饲粮HMTBA添加水平增加呈二次线性变化（先降低，后增加）。随饲粮DLM添加水平增加，GNMT（P=0.04）、MSR（P=0.06）和SAHH(P=0.07)表达量呈二次线性变化（先降低，后增加）。肝脏中IL-1β(P=0.04)和IL-10(P=0.05)的表达量随饲粮HMTBA水平增加而线性增加，TNF-α（P=0.08）的表达量也有线性增加的趋势。
　　饲粮中添加高水平的HMTBA可能通过上调MS和MAT2A基因的表达，增加叶酸依赖途径的蛋氨酸再生和依赖SAMe的甲基转移反应，增加肉种鸡肝脏的脂肪含量，上调炎性细胞因子IL-1β、IL-10及TNF-α的表达，增加发生FLHS的风险。
　　试验二 限饲条件下饲粮营养水平及蛋氨酸来源和添加水平对商品蛋鸡肝脏蛋氨酸及脂质代谢的影响
　　本试验的目的是考察限饲条件下饲粮营养水平及蛋氨酸来源和添加水平对商品蛋鸡肝脏蛋氨酸及脂质代谢的影响。试验采用完全随机试验设计，分别在2种饲粮营养水平(MN:AMEn,2700kcal/kg,Dig.Lys0.66％;LN:AMEn,2580kcal/kg,Dig.Lys,0.61％)下添加两种不同来源的蛋氨酸（DLM和HMTBA），每种蛋氨酸设置3个添加水平（LN:0、0.091和1％;MN:0、0.113和1％）。将2000只罗曼蛋鸡随机分配到10个处理，每个处理10个重复。
　　在饲喂LN饲粮的条件下:与负对照组相比，添加0.091％的蛋氨酸显著降低了相对肝重（P≤0.05）。在饲喂MN饲粮的条件下:与负对照组相比，添加0.113％或1％的蛋氨酸显著增加了血浆TG含量(P≤0.05)。无论饲粮营养水平如何，蛋氨酸来源和添加水平对血浆E2含量、肝脏及血浆Hcy含量无显著影响(P＞0.10)。在饲喂LN饲粮的条件下:饲喂DLM时血浆Met和Tau含量显著高于饲喂HMTBA的蛋鸡(P≤0.05)。与负对照组相比，随着蛋氨酸添加水平的增加，血浆Met和Tau含量增加(P≤0.05)。在饲喂MN饲粮的条件下:DLM处理组蛋鸡的血浆Tau含量显著高于HMTBA处理组的蛋鸡（P≤0.05）。与负对照组相比，血浆Met含量随着饲粮蛋氨酸添加水平增加而增加（P≤0.05）;添加1％的蛋氨酸显著增加了血浆Tau的含量(P≤0.05)。
　　在饲喂LN饲粮的条件下:与负对照组相比，以HMTBA为来源提供0.091％或1％的蛋氨酸显著增加了GNMT的相对表达量(P≤0.05);添加1％的蛋氨酸(DLM来源)显著增加了BHMT的相对表达量(P≤0.05)。在饲喂MN饲粮的条件下:与负对照组相比，添加0.113％或1％的蛋氨酸（HMTBA来源）显著增加了ADA的相对表达量（P≤0.05）;添加0.113％的蛋氨酸（HMTBA来源）显著增加了MS的相对表达量（P≤0.05）。不添加蛋氨酸时，饲喂LN饲粮显著增加了BHMT和MS基因的相对表达量(P≤0.05)。以HMTBA为来源添加1％的蛋氨酸时，饲喂LN饲粮显著增加了SAHH和MTHFR的基因表达(P≤0.05)。添加1％的蛋氨酸（HMTBA来源）时，饲喂LN饲粮显著增加了CEBPβ和AdipoR2的表达量（P≤0.05）。在饲喂LN饲粮的条件下:与负对照组相比，添加1％的蛋氨酸（DLM来源）显著增加TNF-α的相对表达量(P≤0.05)。在饲喂MN饲粮的条件下，蛋氨酸来源和添加水平对肝脏炎性因子的相对表达量均无显著影响(P＞0.10)。
　　添加1％蛋氨酸（HMTBA来源）时，饲喂LN饲粮显著增加了INF-α和IL-1γ的相对表达量（P≤0.05）。
　　(1)蛋氨酸缺乏会上调肝脏MS和BHMT基因的表达，增加蛋氨酸再生，但不影响肝脏脂质代谢相关基因及肝脏促炎性细胞因子基因的表达。(2)以HMTBA为蛋氨酸来源添加1％的蛋氨酸时，饲喂低营养水平的饲粮可能通过上调SAHH和MTHFR基因表达增加叶酸依赖途径的蛋氨酸再生和依赖SAMe的甲基转移反应，上调脂肪合成转录因子CEBPβ表达，促进肝脏脂肪的合成，并上调肝脏促炎性细胞因子的表达，增加肝脏炎症反应的风险。
　　试验三 限饲条件下饲粮营养水平和HMTBA生物学效价对蛋鸡肝脏蛋氨酸和脂质代谢的影响
　　本试验的目的是考察限饲条件下饲粮营养水平和HMTBA生物学效价对蛋鸡商品蛋鸡肝脏蛋氨酸代谢及脂质代谢的影响。试验采用完全随机试验设计，分别在2种饲粮营养水平（同试验二）下设置5种蛋氨酸处理（D:负对照;DLM-R:正对照;HMTBA-R80:相对效价80％;HMTBA-R84:相对效价84％;HMTBA-R88:相对效价88％）。将2000只罗曼蛋鸡随机分配到10个处理，每个处理10个重复。
　　以80％的生物学效价添加HMTBA时，饲喂LN饲粮较MN饲粮显著增加了SREBP1、ACC、LPL和AdipoR1的表达量（P≤0.05），有增加CEBPβ(P=0.07)和AdipoR2（P=0.07）表达量的趋势。在不添加蛋氨酸的情况下，饲喂LN饲粮较MN饲粮显著增加了BHMT和MS基因的表达量（P≤0.05），而以80％的效价添加HMTBA时饲喂LN饲粮较MN饲粮显著增加了SAHH、ADK、BHMT及PEMT的表达量（P≤0.05），有增加MS(P=0.07)、MSR（P=0.06）和MTHFR(P=0.07)表达量的趋势。
　　以88％、84％或80％的生物学效价添加HMTBA不影响蛋鸡的生产性能，但是以80％生物学效价添加HMTBA时，饲喂低营养水平的饲粮可能会影响肝脏蛋氨酸代谢，并上调肝脏脂肪合成因子CEBPβ和SREBP1的表达，促进肝脏脂肪的合成。
　　试验四 自由采食条件下饲粮营养水平和HMTBA生物学效价对蛋鸡生产性能及肝脏脂质代谢的影响
　　本试验的目的是考察自由采食条件下饲粮营养水平和HMTBA生物学效价对商品蛋鸡生产性能及脂质代谢的影响。试验采用完全随机试验设计，分别在2种饲粮营养水平（LN:Dig.Lys0.61％，AMEn2460kcal/kg和MN:Dig.Lys0.67％，AMEn2700kcal/kg）下设置5种蛋氨酸处理（D:负对照;DLM-R:正对照;HMTBA-R80:相对效价80％;HMTBA-R84:相对效价84％;HMTBA-R88:相对效价88％）。将1500只罗曼蛋鸡随机分配到10个处理，每个处理10个重复。
　　在饲喂LN饲粮的条件下:与负对照组相比，添加HMTBA显著降低肝脏相对重量(P≤0.05)，以80％效价添加HMTBA显著增加了腹脂重(P≤0.05)。与DLM添加组相比，各HMTBA组对各指标的影响无显著差异（P＞0.10）。在饲喂MN饲粮的条件下:与负对照组相比，添加DLM或HMTBA对各指标的影响均无显著差异(P＞0.10)。与DLM添加组相比，以80％效价添加HMTBA显著增加了肝脏重、腹脂重和腹脂率(P≤0.05)。
　　在自由采食条件下，将HMTBA的相对生物学效价设定为88％、84％或80％不影响蛋鸡的生产性能，但以80％效价添加HMTBA可能会增加蛋鸡肝脏的脂肪含量。
　　综上所述，对于肉种鸡:以HMTBA为来源添加1％的蛋氨酸可能通过增加MS和MAT2A基因的表达，活化叶酸依赖途径的蛋氨酸再生及依赖SAMe的甲基转移反应，进而增加肉种鸡肝脏的脂肪含量，上调炎性细胞因子IL-1β、IL-10及TNF-α的表达，增加发生FLHS的风险。对于商品蛋鸡:(1)蛋氨酸缺乏会降低蛋鸡生产性能，并上调肝脏MS和BHMT基因的表达，增加蛋氨酸再生，但不影响脂肪合成调节因子、肝脏脂肪的合成及分解关键酶基因的表达，也不影响肝脏炎性细胞因子基因的表达。(2)以HMTBA为蛋氨酸来源添加1％的蛋氨酸时，饲喂低营养水平的饲粮可能通过上调SAHH和MTHFR基因增加蛋氨酸再生和蛋氨酸甲基代谢，上调脂肪合成转录因子CEBPβ，调节肝脏脂肪的合成，并上调肝脏炎性细胞因子的表达，增加肝脏炎症反应的风险。(3)从产蛋鸡肝脏健康的角度出发，HMTBA相对于DLM的相对生物学效价设置为88％（等质量）更好，在饲喂低营养水平饲粮的情况下可以减少蛋鸡肝脏脂肪合成，肝脏炎症反应的风险更低。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

第一部分文献综述

1产蛋期蛋鸡肝脏脂肪含量的变化及雌激素的调节作用

2蛋氨酸与肝脏脂质代谢的关系

2．1 蛋氨酸代谢与肝脏健康

2．2 SAMe与DAN甲基化、葡萄糖及脂肪酸代谢

2．3 Hcy与炎性细胞因子和脂肪肝

3蛋氨酸来源和水平与肝脏脂质代谢

3．1 饲粮蛋氨酸水平与肝脏脂质代谢的关系

3．2 饲粮蛋氨酸来源与肝脏脂质代谢的关系

4喂料方式及采食量与肝脏脂质代谢

第二部分本研究的选题依据及研究的目的与意义

1存在的问题

2研究内容及目的与意义

2．1 本研究的目的

2．2 本研究的意义

3技术路线

第三部分试验研究

2试验设计与处理设置

3材料与方法

4结果

5讨论

6结论

试验二限饲条件下饲粮营养水平及蛋氨酸来源和添加水平对商品蛋鸡肝脏蛋氨酸及脂质代谢的影响

1引言

2试验设计与处理设置

3材料与方法

4结果

5讨论

6结论

试验三限饲条件下饲粮营养水平和HMTBA生物学效价对蛋鸡肝脏蛋氨酸和脂质代谢的影响

1引言

2试验设计与处理设置

3材料与方法

4结果

5讨论

6结论

试验四自由采食条件下饲粮营养水平和HMTBA生物学效价对蛋鸡生产性能的影响

1引言

2试验设计与处理设置

3材料与方法

4结果

5讨论

6结论

1全文讨论

2全文结论

2．1 本研究的主要结论

2．2 本研究的主要创新点

2．3 有待进一步研究的问题

参考文献

致谢