核桃枯枝病病原鉴定及化学防治研究

摘要

核桃枯枝病是核桃枝干部位由于病原入侵和其它媒介传播病菌引起核桃枝干腐朽枯死的一种严重病害。近几年，由于菌源积累、栽培管理粗放、病虫防治技术不到位等原因，核桃枯枝病已成为四川省广元市剑阁县核桃种植区主要病害，严重威胁着核桃生产，给果农带来了严重的经济损失，成为当地核桃生产的一大制约因子。目前相关研究内容深度和广度都不够。为了对核桃枯枝病进行深入研究，采用随机布点进行采样，采集了不同发病阶段的枝干样品30份，采用常规组织分离法分离纯化核桃枯枝病病原菌，菌株的致病性验证采用柯赫氏法，对核桃枯枝病病原菌的鉴定一般采用分子生物学和形态学特征等多种方法，对核桃枯枝病病原菌的生物学特性研究则是采用菌落生长法。
　　在此基础上，测定了15种常用杀菌剂的单剂对核桃枯枝病菌的抑制作用并进行了室外盆栽防效试验。主要研究结果如下:
　　1、核桃枯枝病病原分离及鉴定结果
　　将该病原菌鉴定为拟茎点霉Phompsis capsici，其GenBank序列登录号为KY345415。病原菌能产生2种分生孢子。其中甲型(α)分生孢子具有以下特性:孢子种类为单孢，且为无色，孢子未见分隔，形状多为卵圆形或椭圆形，其两端生出两个较为明显的油球，长宽分别为5.6-9.2×1.0-2.2μm;乙型(β)分生孢子具有以下特性:孢子种类为单孢，且为无色，孢子未见分隔，性状多为相对较弯曲的线形，孢子的一端表现为钩状，孢子表面未见油球，其长宽分别为21.6-30.4×0.2-0.4μm。
　　2、核桃枯枝病病病原生物学特性研究
　　一般而言，在最适环境下，病菌菌丝生长和产孢均能达到最大化。经研究后发现，核桃枯枝病病原菌在10-35℃温度范围内，菌丝能生长，为最适温度区间。而在PDA培养基中该病原菌生长表现最佳。进一步研究后发现，多种碳、氮源都可以作为该病原菌菌丝的生长条件，本试验设计了9种不同类别碳、氮源以测试该病原菌最适生长环境，实验结果为:蔗糖和果糖是该病原菌生长的最适碳源，而钼氨酸和苯丙氨酸是该病原菌生长的最适氮源。25℃则为该病原菌生长的最适温度。在pH5-12范围内该病原菌均能够正常生长，其中pH=7是该病原菌的最适酸碱度。对比光照环境，在黑暗处理后该病原菌的菌丝生长最快。Phompsis capsici产孢时间相对较长，综合对比试验后得出:黑暗条件下采用PDA培养基培养该病原菌更容易产生分生孢子。该病原菌的致死温度最低为55℃，时间最低为10min。
　　3、室内药剂筛选
　　室内药剂化学防治结果表明，在设计不同浓度药剂处理中，在一定程度上抑制了核桃枯枝病病原菌的菌丝的正常生长的杀菌剂共有15种。该病原菌菌丝受到该15种药剂的抑制影响各有强弱，其中对核桃枯枝病病原菌的抑制效果最佳的是浓度为25％的嘧菌酯药剂，EC50为0.6621ug/mL。43％戊唑醇、0.3％四霉素、33.5％喹啉铜、40％咪鲜胺、1％申嗪霉素、75％抑霉唑硫酸盐的抑制作用相对较强，EC50分别为1.0884ug/mL、3.2906ug/mL、4.2452ug/mL、4.3799ug/mL、4.4015ug/mL、8.9220ug/mL。
　　4、室外盆栽试验
　　连续喷雾3次，每次间隔7d，浓度为25％的嘧菌酯500倍液药剂对核桃枯枝病病原菌的防治效果相对表现最佳，平均防效率为86.81％，而浓度为0.3％的四霉素500倍液药剂对核桃枯枝病病原菌防治效果次之，平均防效率为85.68％，两者差异不显著。40％咪鲜胺的防治效果最差，平均防效最高仅为45.32％。结果表明25％嘧菌酯是防治核桃枯枝病的高效化学药剂，0.3％四霉素可以作为备选药剂。

目录

声明

摘要

前言

1文献综述

1．1．3国内外核桃生产概况

1．1．4四川核桃生产存在的问题

1．2核桃病害研究现状

1．3核桃枯枝病研究

1．3．1核桃枯枝病的发生与危害

1．3．2核桃枯枝病发病症状

1．3．3核桃枯枝病的流行规律

1．3．4核桃枯枝病病原学研究

1．3．5核桃枯枝病的发病因素

1．3．6核桃枯枝病的防治

1．4拟茎点霉属研究现状

1．4．1拟茎点霉属为害状况

1．4．2拟茎点霉属真菌分类及鉴定的研究

1．5杀菌剂研究现状

1．5．1杀菌剂定义

1．5．2杀菌剂作用原理和方式

1．5．3杀菌剂发展方向

2．1目的意义

2．2研究内容与技术路线

3材料与方法

3．1实验材料

3．1．1供试菌株来源

3．1．2供试培养基

3．1．3供试药剂

3．1．4供试杀菌剂

3．1．5实验仪器

3．2实验方法

3．2．1核桃枯枝病病株采集

3．2．2病原菌的分离培养

3．2．3分离物的致病性测定

3．2．4病原菌的形态学观察

3．2．5病原菌的鉴定

3．2．6病原菌的生物学特性研究

3．2．7室内药剂筛选

3．2．8室外盆栽防效试验

3．3数据处理与统计分析

4结果与分析

4．1核桃枯枝病病害症状

4．2病原菌的分离、纯化

4．3病原菌致病性测定

4．4形态学鉴定

4．5病原菌rDNA-ITS序列分析

4．6病原菌的生物学特性研究

4．6．1培养基种类对菌丝生长的影响

4．6．2不同碳源、氮源对菌丝生长的影响

4．6．3温度对蕾丝生长的影响

4．6．4 pH对菌丝生长的影响

4．6．5光照对菌丝生长的影响

5．6．6致死温度的测定

4．7室内药剂筛选

4．7．1供试杀菌剂对核桃枯枝病菌菌丝生长的抑制作用

4．7．2供试杀菌剂对核桃枯枝病菌的毒力比较

4．8盆栽试验

5结论与讨论

5．1核桃枯枝病病原鉴定

5．2核桃枯枝病病原生物学特性研究

5．3室内药剂筛选

5．4盆栽试验

6问题和展望

参考文献

致谢

作者简历