补气中药对骨髓抑制贫血小鼠造血调控的实验研究

摘要

目的 人参为五加科多年生草本植物人参Panax Ginseng.C.A.Mey的根，为常用补气要药，具有大补元气、补脾益肺、生津、安神的功效。西洋参：Panax Quinquefolium 1.同为五加科多年生草本植物的根，功效为补气养阴、清火生津。黄芪为豆科多年生草本植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch)Bge.var.mongholieus(Bge)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge的干燥根，味甘性温， 具有补气行气、生肌补血、健脾胃、壮筋骨等功效。本研究对三种补气类中药的皂甙提取物(TSPG、AMI和TSP)的补气功能和机理进行了研究和比较。 方法 本研究采用复合造模法造成骨髓抑制贫血小鼠模型，应用造血祖细胞体外培养、流式细胞术、细胞因子检测、免疫组织化学染色、RT—PCR、荧光定量PCR和Western Blot等技术。首次从细胞、蛋白质和基因表达水平对补气类中药提取物的作用及其机理，进行了较系统深入的研究和比较。 结果 表明三种补气类中药提取物，在一定浓度范围： 1． 能促进贫血小鼠外周血像的恢复、升高BMC数，尤其是对．RBC、PLT数升高、Hb的合成作用明显。动物体内用药可明显促进造血祖细胞集落生长；造血祖细胞的体外用药培养中，TSPG表现类生长因子样作用，对造血祖细胞既有直接促进作用也有间接作用。西洋参茎叶皂甙对祖细胞的作用范围较窄，主要对巨核系祖细胞生长呈现促进作用，作用方式与人参有相似之处，既体现直接又有间接作用；而AMI似乎以间接调控为主。 2．可促进贫血小鼠升高BMC数，一方面促进静止期BMC进入细胞周期，进而促进细胞增殖，另一方面促进抗凋亡蛋白Bcl—xL的表达，抑制凋亡的发生，维持细胞的存活。 3．可影响造血微环境。促进成纤维细胞集落增殖，通过促进基质细胞分泌造血生长因子，调控血发生。三种中药促进造血生长因子表达的时间曲线略有区别。TSP在造血受损初期能促进TPO 的基因表达，使骨髓抑制造成的血小板下降能提早得以恢复。 4．人参总皂甙、西洋参茎叶皂甙可调控造血生长因子受体EPOR的基因表达。从基因水平影响造血祖细胞对胞外刺激信号的应答；三种中药都能促进转录因子GATA—1的基因表达，通过调控转录因子的基因表达影响其特定靶基因的转录。 5． 在不同浓度对对进K562细胞增殖都表现不同的调节作用，只有高浓度的TSPG促进GATA—1蛋白的增强表达，再一次显示其独特的生长因子样活性。 结论上述结果显示，三种补气中药对造血的调控是多种途径多层次进行的。一方面可以影响组成微环境的基质细胞的细胞因子基因表达或蛋白分泌，促进造血；另一方面也可以调控祖细胞本身的转录因子，进而调控生长因子或生长因子受体的基因表达，影响造血细胞对生长信号的应答，促进细胞进入增殖周期。补气类三种中药还可以通过促进抗凋亡蛋白的表达，抑制凋亡的发生，维持血发生过程中细胞的存活。而达到“补气生血”的功效，本研究从首次比较了三种补气中药的共性和个性，研究提示，它们虽然都能补气生血，但作用环节和作用途径不尽相同，有的似乎以间接调控为主；有的则既有间接作用又有直接作用；TSPG对粒系、红系和巨核系三系均有影响， TSP 似乎只对巨核系造血个性功效显著；TSPG和 TSP 能促进EPOR的基因表达，而AMI对此却无明显作用；虽然都能促进IL-6的分泌，但IL-6的分泌时间曲线是不同的；虽然补气三种中药对K562细胞增殖都表现双向调节作用，只有TSPG促进GATA-1蛋白的增强表达；上述研究为中医补气药的临床应用和中医气血理论提供了新的有价值的实验依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写词表

前言

第一部分三种补气中药对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究

第二部分补气类三种中药对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期和凋亡调控的研究

第三部分补气类三种中药对骨髓抑制小鼠细胞因子及细胞因子基因表达的调控研究

第四部分补气类三种中药对骨髓抑制小鼠生长因子受体EPOR及转录因子GATA-1mRNA表达的研究

第五部分补气类三种中药对K562细胞细胞周期和转录因子GATA-1蛋白表达的研究

结论

补气中药皂甙提取物“补气生血”机理假说示意图

致 谢

参考文献

综述