黑色素瘤中凋亡相关基因的cDNA微阵列研究与ML-IAP表达状况的检测

摘要

恶性黑色素瘤(MM)对诱导细胞凋亡的各种治疗手段高度耐受，提示MM中存在严重的凋亡调控紊乱。然而，MM复杂的抗凋亡机理尚未阐明，也缺乏MM组织中凋亡调控基因总体表达的系统研究。ML-IAP是近年发现的细胞内源性凋亡抑制蛋白IAP家族的成员，在一些黑色素瘤细胞株中高表达，是MM治疗的潜在靶点，但ML-IAP在良恶性黑色素细胞病变组织中的表达情况尚不清楚。针对上述问题，本研究试图(1)系统了解MM和黑色素细胞痣组织中凋亡相关基因的总体表达状况；(2)对ML-IAP蛋白和mRNA在MM和黑色素细胞痣组织中的表达状况进行检测，确定其表达率。 材料与方法：(1)采用人凋亡相关基因cDNA微阵列(HS-002，SuperArray)检测6例MM和3例黑色素细胞痣组织中96种凋亡相关基因的差异表达谱。(2)设计和制备ML-IAPcDNA显色原位杂交(CISH)探针，建立ML-IAPCISH和RT-PCR检测方法，同时利用免疫组织化学(IHC)，检测34例MM与14例黑色素细胞痣存档组织中ML-IAP蛋白2质和mRNA的表达率。 结果：凋亡通路基因微阵列分析显示：(1)凋亡抑制基因cIAP1、cIAP2、XIAP、Apollon/Bruce和Bcl-2、Bcl-xL、BCL2A1等在MM中高表达。(2)Caspase途径上游分子caspase8、caspase9等在恶性黑色素瘤中的表达水平低。(3)一些促凋亡基因，如Bax、Bak和凋亡效应分子caspase3等在MM中亦有较高表达水平。(4)TRAF、TNF和TNFR超家族的大多数成员在MM和黑色素细胞痣中表达均低。 采用IHC、CISH和RT-PCR检测MM和黑色素细胞痣组织中的ML-IAP，结果显示：(1)ML-IAP在MM中的阳性率(47.6％～70.6％)明显高于其在黑色素细胞痣中的阳性率(21.4～25.0％)(p＜0.05)。(2)原发和转移性MM之间，ML-IAP阳性率无明显差异(p＞0.05)。(3)IHC、CISH和RT-PCR三种方法检测ML-IAP的结果基本一致。 结论：(1)MM组织中，IAP家族和Bcl-2家族基因的高表达，以及caspase家族上游分子(caspase8和9)的低表达，可能在MM抗凋亡机制中起重要作用。部分促凋亡基因(如Bax和caspase3)亦有较高表达水平，其机理和作用有待探讨。(2)MM组织中ML-IAP的阳性率为47.6％～70.6％，高于黑色素细胞痣中ML-IAP的阳性率(21.4～25.0％)，提示ML-IAP可能在恶性黑色素瘤发生中起重要作用。(3)原发性和转移性MM中ML-IAP的阳性率无明显差异(p＞0.05)，提示ML-IAP在MM转移潜能的获得中作用较小。

目录

声明

缩略词表

前 言

第一部分利用通路特异性cDNA微阵列研究黑色素瘤和黑色素细胞痣中凋亡相关基因的表达谱

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分ML-IAP在人恶性黑色素瘤和黑色素细胞痣中的差异表达

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

综述Livin的结构、功能及调节

致 谢

简 历