高脂诱导胰岛素抵抗大鼠胰岛内胰淀素的表达及对凋亡的影响及二甲双胍、罗格列酮的作用

摘要

研究目的：(1)观察胰岛素抵抗形成过程中不同时段胰岛内胰岛胰淀素的表达，及胰岛内凋亡的发生，并分析是否具有相关性(2)应用二甲双胍及罗格列酮药物进行干预，是否能够降低胰淀素的表达，是否能够逆转胰岛的凋亡或者对抗脂毒性引起的凋亡。 实验对象及研究方法 (1)40只Wistar雄性大鼠，随机分为高脂组和正常饲料对照组，每组20只，同期喂养，各组再分别为喂养10、14、16、18、20周五个亚组，每亚组大鼠4只。 (2)36只Wistar雄性大鼠，随机分为药物干预组(二甲双胍及罗格列酮组各12只)，高脂组、对照组，每组6只。其中药物干预分为胰岛素抵抗模型形成时开始干预与高脂饲养开始即饲养组两组，分别饲养8周。其中二甲双胍剂量为300mg／kg.d，罗格列酮为4mg／kg.d，其中对照组与高脂组分别为4ml／d。 按照实验设计，在各时段末处死动物。处死前前禁食过夜12-14小时，以0.3％戊巴比妥钠(40mg／kg)腹腔注射麻醉。麻醉后先断尾取血测血糖。然后开胸，暴露心脏，从心脏中取血2ml，用于测定胰岛素、游离脂肪酸、甘油三酯及胆固醇等指标。迅速取出胰腺，均于冰PBS中洗去血液，将胰腺组织分出其中一部分来行免疫组化，病理切片及电镜。将获得的动物的胰腺分别进行组织标本的制备、HE染色切片上测定胰岛面积，免疫组织化学检测胰岛中胰淀素的表达，刚果红染色检测胰岛中的淀粉样蛋白，TUNEI，检测胰岛细胞的凋亡，电镜检测药物观察干预后胰岛B细胞内超微结构的改变。 结果：1 在胰岛素抵抗的发生过程中，较对照组而言，10、14、16、18、20周胰淀素信号增强，并有统计学差异，在胰岛内刚果红染色信号在10、14周无统计学差异，在16周时染色信号增强，并较正常组有统计学差异，18、 20周差异明显。2 胰岛内细胞发生凋亡，在高脂组从10周开始出现，较对照组有统计学差异，而在对照组，16周正常组胰岛内出现凋亡。 3 对胰岛内的凋亡率及胰岛内胰淀素的IOD值及刚果红染色的IOD值进行相关性分析，发现凋亡率与胰淀素的IOD值呈正相关性，而与胰岛内刚果红染色的IOD值无相关性。4 运用二甲双胍及罗格列酮药物干预后，都能减少胰淀素的表达，降低胰岛淀粉样沉积，胰岛内凋亡较对照组显著减少。 结论：(1)高脂组肥胖大鼠在IR形成过程中伴随者胰岛内胰淀素的表达逐渐升高，并进行相关分析发现胰岛内细胞发生的凋亡率与胰岛内Amylin染色IOD值正相关。与胰岛内刚果红染色IOD无相关性。 (2)二甲双胍及罗格列酮能降低胰岛内胰淀素的表达，能拮抗胰岛素抵抗形成过程中的胰岛β的病理损害，在胰岛素抵抗成模后药物干预，能部分逆转，但不能完全逆转胰岛β细胞损害。

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综述 胰岛素抵抗与B细胞凋亡

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