NF-κB依赖性炎症介质在口腔扁平苔藓中的表达及其相关信息通路的研究

摘要

口腔扁平苔藓(oral lichen planus，OLP)是一种慢性炎症性口腔粘膜病，其组织学特征是上皮基底细胞的液化变性和固有层大量的T淋巴细胞呈带状浸润。目前大多数研究认为该病与免疫反应的异常有关。各种炎症介质，包括细胞因子、生长因子、粘附因子、蛋白酶类等在介导这一异常的免疫反应中起着主要作用。近年研究发现，口腔扁平苔藓患者血清中‘TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6等多种细胞因子分泌水平增高，高度提示细胞因子紊乱在口腔扁平苔藓的发生发展中起着重要的作用。然而迄今为止，口腔扁平苔藓患者炎症介质调控和释放的确切机制尚不明确。目前，核转录因子-κB(nuclearfactor-κB，NF-κB)对炎症介质的调控作用成为近年来广受关注的研究课题。NF-κB是一类能与多种基因启动子发生特异性结合并增强其转录的一种蛋白质因子。活化的NF-κB与靶基因结合后即可调节其基因转录并促进其表达。因此，从NF-κB角度研究口腔扁平苔藓的发病机理进而寻找病情监控、疗效检测的敏感指标，探索口腔扁平苔藓治疗新策略是研究的新方向，具有深远的理论意义和临床实用价值。 1．探讨口腔扁平苔藓患者血清和唾液中NF-κB依赖性炎性介质TNF-α、 IL-6、IL-8、MMP-9的表达情况及其临床意义，并从中筛选出有利于指导临床的敏感性指标。 2．检测NF-κB、MMP-9蛋白在口腔扁平苔藓病损部位组织中表达情况，揭示其在口腔扁平苔藓发病机制中的作用、二者表达的相互关系及其与临床病理特征之间的关系。 3．探讨NF-κB信息通路在口腔扁平苔藓患者外周血单个核细胞(peripheral blood monouclear cells，PBMC)中对MMP-9表达的调控机制。 研究方法： 1．口腔扁平苔藓患者血清和唾液中TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的检测。30例资料完整的口腔扁平苔藓患者(糜烂型16例，网纹型14例)和30例健康志愿者纳入研究，同时配对收集其血清和唾液样本。采用ELISA法对样本中TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的含量进行测定，分析四个指标在血清和唾液中表达的相关性。 2．采用免疫组织化学方法检测22例口腔扁平苔藓患者(糜烂型和网纹型各11例)及10例正常口腔粘膜中NF-κB p65、MMP-9蛋白的表达情况，分析NF-κBp65、MMP-9蛋白表达的相关性。 3．分离口腔扁平苔藓患者PBMC体外培养，采用免疫细胞化学方法、EIJSA法观察经10ng／mlTNF-α仅刺激24h后，PBMC中NF-κB的活化状况，以及PBMC表达MMP-9的量的变化；运用NF．1出的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)预处理抑制NF-κB的活化，观察TNF-α对体外培养的口腔扁平苔藓患者PBMC中MMP-9蛋白表达量影响的改变。 研究结果： 1．口腔扁平苔藓患者血清和唾液中TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的检测结果：①与健康对照组相比，口腔扁平苔藓患者血清和唾液中TNF-α、IL-6、IL-8和MMP-9均有不同程度的增高。进一步对口腔扁平苔藓的两种亚型进行分析，发现血清中上述四个指标在糜烂型与网纹型中的表达未见明显差别；糜烂型口腔扁平苔藓唾液中IL-8和MMP-9的含量较网纹型口腔扁平苔藓明显增高；②口腔扁平苔藓患者唾液TNF-α、IL-6、IL-8和MMP-9的表达较血清明显增高，TNF-α、IL-6、IL-8和MMP-9在两种检测媒介中的表达均呈正相关关系。 2．NF-κB p65蛋白在口腔扁平苔藓中阳性率为77．3％，而在正常口腔粘膜组仅有1例呈弱阳性表达。其在网纹型口腔扁平苔藓中阳性率为54．5％，糜烂型口腔扁平苔藓阳性率为100％，两组之间比较差异具有统计学意义(P=0．04<0．05)。MMP-9蛋白在口腔扁平苔藓中阳性率为63．63％，而在正常口腔粘膜组仅有1例呈弱阳性表达。其在网纹型口腔扁平苔藓中阳性率为36．4％，糜烂型OLP中阳性率为90．9％，两组之间比较差异具有统计学意义(P=0．03<0．05)。口腔扁平苔藓中NF-κBp65与MMP-9蛋白表达存在较高吻合度(κ=0．68，P=0．00<0．05)。 3．PDTC可阻断口腔扁平苔藓患者PBMC源性MMP-9的诱导生成．。应用TNF-α(10ng／m1)作用24h后，OLP组PBMC NF-κB p65细胞染色阳性率、培养上清液MMP-9蛋白含量明显增高，差异有统计学意义。而培养体系预先应用PDTC(1001xmol／L)处理，再用TNF-a(10ng/1)刺激，OLP组PBMC NF-κB细胞染色阳性率和培养上清中MMP-9的分泌量较未加入PDTC组明显下降。 结论： 1．唾液作为检测媒介在口腔扁平苔藓的临床诊治中具有潜在的应用价值。 2．唾液IL-8和MMP-9含量的测定可能成为口腔扁平苔藓病情监控的敏感指标。 3．MMP-9在口腔扁平苔藓病损中的高表达可能是由于各种诱因激活 NF-κB的活化而引发的。NF-κB信息通路的活化可能在口腔扁平苔藓的发病过程中发挥重要作用，同时提示阻断NF-κB信息通路的激活可能成为治疗口腔扁平苔藓药物新的研发靶点。

目录

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分 口腔扁平苔藓患者血清和唾液中NF-кB依赖性炎症介质TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的表达及其相关性研究

第二部分口腔扁平苔藓中NF-кB、MMP-9蛋白表达研究

第三部分PDTC对TNF-α诱导口腔扁平苔藓外周血单个核细胞基质金属蛋白酶-9表达的作用及其机制

第四部分炎症因子网络与口腔扁平苔藓的关系

全文总结

参考文献

附图

附录

综述：核转录因子NF-κB信号通路：口腔扁平苔藓治疗的新靶点

个人简历

致谢