脑挫伤后神经细胞凋亡DNA片段化及含量变化与损伤时间关系的研究

摘要

目的：观察脑挫伤后神经细胞凋亡DNA片段化和含量变化与损伤时间的相关性，探索损伤时间推断的新方法。 方法： ①建立大鼠自由落体打击脑损伤模型； ②对不同损伤时间组的大鼠脑挫伤组织进行TUNEL、CaSpase-3免疫组化、Feulgen's DNA 染色，结合图像分析技术和统计学分析，探讨脑挫伤后神经细胞凋亡、DNA片段化和含量的时序性变化； ③提取大鼠脑挫伤组织DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析，观察DNA片段化随损伤时间的变化特点； ④对117例颅脑损伤致死案例进行回顾性分析，探讨其法医学特点； ⑤选择不同损伤时间的人脑挫伤组织同样进行TUNEL、Caspase-3免疫组化、Feulgen’s DNA染色和分析，观察上述指标与损伤时间的关系。 结果： ①所建立的自由落体打击大鼠脑挫伤模型与法医学中加速性脑损伤相似，可以用于脑损伤实验和法医学研究。 ②大鼠脑挫伤后神经细胞凋亡DNA片段化和含量变化(阳性率和阳性细胞的IOD)，均与损伤时间呈线性关系，并可以导出直线方程应用于法医学研究。 ③大鼠脑挫伤组织DNA片段化6h以后出现梯状谱带，DNA片段化程度和片段大小随损伤时间而变化，但无明显线性关系。 ④颅脑损伤死者在年龄、性别、损伤原因(致伤物)、颅脑损伤类型和病理学改变等方面均有其法医学特点。 ⑤24h以内人脑挫伤中央区Feulgen’s DNA染色：IOD逐渐下降，与损伤时间呈线性关系，r为O.96；48h以内挫伤半影区TUNEL和Caspase-3免疫组化染色阳性率和阳性细胞IOD增高与损伤时间亦呈线性关系，r分别为0.89，O.93和O.92，O.90，均可导出直线方程用于损伤时间推断。 ⑥TUNEL和Caspase-3免疫组化染色均提示可以应用于判断脑挫伤部位。 结论：观察脑挫伤后神经细胞凋亡DNA片段化和含量变化可作为损伤时间推断的新依据；并且可能用于判断脑挫伤部位。

目录

声明

一、主要缩略词英汉对照

摘要

三、前言

四、第一部分大鼠脑挫伤模型的建立与观察

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

五、第二部分大鼠脑挫伤后神经细胞凋亡DNA片段化和含量的时序性变化

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

六、第三部分大鼠脑挫伤组织DNA提取和琼脂糖凝胶电泳观察

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

七、第四部分117例颅脑损伤致死案例的法医学分析

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

八、第五部分人脑挫伤后神经细胞凋亡DNA片段化及含量变化与损伤时间的关系

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

九、全文结论

十、本课题研究的创新点

十一、不足与展望

十二、综述

综述1脑损伤后神经细胞凋亡DNA片段化与检测

综述2创伤性颅脑损伤与损伤时间推断

十三、附录

十四、致谢