实验性大鼠脉络膜新生血管发生机制及治疗研究

摘要

目的：1.以氪激光诱导建立BN大鼠脉络膜新生血管(Choroidalneovascularization，CNV)动物模型，阐述其可用性。2.观察血管生成素-2及其受体Tie-2，和VEGF-B及其受体Flt-1在实验性CNV中的表达，探讨其在CNV中的作用机制。3.并探讨内皮抑素(Endostatin)对实验性CNV的抑制作用。 方法：1.对10只BN大鼠应用氪激光(波长647nm)对实验眼视网膜进行光凝，功率360mW、光斑直径50μm、曝光时间0.05s，创建CNV模型。于光凝后7d，14d，28d，56d和84d行FFA检查。光镜下对HE染色切片进行CNV形态学改变的评价。2.对15只BN大鼠应用氪激光光凝视网膜，建立CNV模型，设为实验组，对另15只BN大鼠只散瞳不光凝。分别于光凝后7d，14d，28d，56d和84d应用免疫组化和原位杂交方法，检测各组大鼠光凝区和正常视网膜中Ang-2及其受体Tie-2、VEGF-B及其受体Flt-1在蛋白和分子水平的表达，分析Ang-2、VEGF-B及其受体在CNV形成中的作用机制。对实验结果进行半定量分析。3.对12只(24眼)BN大鼠双眼进行氪激光光凝，建立CNV模型，随机分为治疗组及对照组各6只(12眼)，治疗组给予endostatin100μ1(0.5mg/ml)，对照组给予BSS100μ1球后注射，测定CNV发生率及面积，免疫组化检测FⅧR：Ag阳性表达水平。对实验结果进行半定量分析。4.实验数据以均值±标准差表示，行方差分析和t检验等统计学处理。 结果：1.FFA光凝斑盘状荧光素渗漏，证实CNV形成。光凝后7d可见荧光素渗漏，可持续至光凝后84d。2.Ang-2mRNA在正常BN大鼠视网膜无表达。实验眼光凝后7d，在激光损伤区Ang-2mRNA表达于视网膜神经节细胞层、内核层、外核层缺损区、视网膜和脉络膜血管内皮细胞，其阳性染色密度最高(P＜0.05)，7d后变化差异不显著(P＞0.05)。实验眼Ang-2及受体Tie-2蛋白质与Ang-2mRNA的表达部位及趋势相同。 Ang-2在正常组织无阳性着染，Tie-2在正常脉络膜血管内皮细胞表达。VEGF-BmRNA在正常BN大鼠视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜和脉络膜血管内皮细胞表达。实验眼光凝后7d，在激光损伤区VEGF-BmRNA表达于视网膜神经节细胞层、内核层、外核层缺损区、视网膜和脉络膜血管内皮细胞及CNV增殖区，14d时CNV增殖区VEGF-BmRNA阳性细胞染色密度最高(P＜0.01)，1月后变化差异不显著(P＞0.05)。VEGF-B蛋白质与VEGF-BmRNA的表达部位及趋势相同。Flt-1在正常视网膜色素上皮细胞、外界膜及外丛状层有阳性表达，视细胞层内侧及外核层有轻度着染。实验眼光凝7d后，Flt-1在神经节细胞层、内核层、外核层缺损区及CNV增殖区有阳性着色。14天时阳性染色密度最强。1月后随CNV的增殖，CNV阳性染色密度变化差异不显著(P＞0.05)。3.FFA提示endostatin组CNV发生率小于BSS组(P＜0.05)。组织学检查CNV面积endostatin组小于BSS组(P＜0.05)。在正常及非光凝区视网膜，FⅧR：Ag在视网膜大血管、神经纤维层小血管、脉络膜各层血管内皮细胞呈阳性着染。视网膜光凝14天后，光凝区处神经纤维层小血管，脉络膜各层血管内皮细胞仍呈阳性着染。光凝区视网膜内外核层结构紊乱处FⅧR：Ag大量阳性着染。endostatin组FⅧR：Ag阳性反应密度显著低于BSS组(P＜0.05)。 结论：1.氪激光可以诱导产生BN大鼠CNV，维持时间长，病理结构稳定，方法简单，可重复性好。2.Ang-2和Tie-2结合，共同参与CNV形成。VEGF-B和Flt-1通过自分秘和旁分泌途径在新生血管形成部位结合，引起Flt-1磷酸化，诱导内皮细胞分化和CNV形成。3.endostatin可以抑制氪激光诱导的BN大鼠CNV形成和发展。

目录

英文缩略词表

前言

前言

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分Ang-2、VEGF-B及受体在实验性CNV中的表达及意义

结果

讨论

结论

参考文献

第三部分内皮抑素抑制大鼠脉络膜新生血管的实验研究

结果

讨论

结论

参考文献

附图1

附图2

附图3

综述一 脉络膜视网膜新生血管相关因子

综述二 Angiopoictin及其受体Tic-2与新生血管性眼病

致谢