Ad5CMVeNOS转导静脉桥对犬颈动脉旁路移植术后血管狭窄影响——体外研究及机制探索

摘要

全文共由四部分组成.第一部分：重组内皮一氧化氮合酶腺病毒扩增纯化及病毒滴度滴定;目的：在心血管疾病中,常有内皮一氧化氮合酶（eNOS）和NO的产生发生改变.因此在心血管疾病基因治疗中,eNOS基因成为一个具有吸引力的目的基因.同时由于腺病毒载体是高效的载体系统,故采用腺病毒介导的重组内皮一氧化氮合酶（Ad5CMVeNOS）进行相关实验研究.结论：成功地进行了两种重组腺病毒扩增及纯化,达到了高病毒滴度的重组腺病毒,为进一步开展血管疾病基因治疗的体外体内实验研究,作好了充分的准备工作.第二部分：Ad5CMVeNOS在成纤维细胞水平上转染与表达;目的：由于血管外膜的成纤维细胞也成为血管狭窄,特别是血管向内再构的主要原因,外膜成纤维细胞增生并迁移,更主要是向肌成纤维细胞的分化,成为新内膜形成和血管再构的原因之一.故外膜成为目前基因治疗的研究热点,为此在成纤维细胞水平上进行了转染实验研究.结论：Ad5CMVeNOS体外能有效转染小鼠成纤维细胞PA317,并获得蛋白表达.这种作用为重组内皮一氧化氮合酶通过血管局部转染,以血管外膜作为治疗途径之一提供了理论依据.第三部分：重组腺病毒对不同表达细胞和血管环转染的体外研究;目的：比较重组腺病毒对不同细胞、特别对血管细胞的转染和对人冠状动脉旁路移植动脉静脉血管的转导,为携带目的基因的重组腺病毒治疗血管狭窄提供更好的转染途径.结论：从细胞水平上证明了腺病毒载体能将治疗性目的基因导入各种血管细胞,从组织水平上证明了动脉和静脉血管都获得了蛋白表达.提示不仅血管内膜和外膜都能被重组腺病毒有效转染;而且从理论上间接说明临床无论动脉或静脉的血管狭窄都可用腺病毒作为载体运行基因治疗和预防.第四部分：Ad5CMVeNOS对犬颈动脉旁路移植术后静脉桥狭窄影响及机制探索;目的：为冠状动脉旁路移植术后大隐静脉近期和远期血管再狭窄提供一种有效的基因治疗手段,避免目前使用的血管内加压灌注造成的内皮损伤和血流冲洗等缺点,更好地进行临床干预和治疗.我们观察了Ad5CMVeNOS通过局部转移方法对犬颈动脉旁路移植术后静脉桥血管狭窄的影响,及从另一方面进行了其机制的初步实验研究.结论：腺病毒介导的eNOS基因局部转染静脉血管,显著抑制犬颈动脉旁路移植术后颈静脉桥血管的狭窄;这可能机制与NO产生增多,NO直接或间接地抑制了TGF-β1分泌及由