缺血预处理预防肝脏缺血再灌注损伤的体外实验研究

摘要

缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)是预防肝脏缺血再灌注损伤最强有力的内源性保护措施,但其确切机制仍不明了.迄今为止,国内外有关IP的研究主要集中在体内实验研究,鉴于肝脏由多种细胞组成,又受神经、体液调节,干扰因素多,因此我们通过体外实验来观察IP对肝脏的保护作用并探讨其可能的机制.在该研究中,我们首先分离、培养大鼠肝细胞,建立IP预防肝脏缺血再灌注损伤的体外模型,利用基因芯片技术筛选出与IP相关的基因,并在蛋白质水平上分析IP的可能作用机制.另外,我们还利用原代培养的大鼠肝窦内皮细胞(hepatic sinus endothelial cell,HSEC),研究其在IP预防肝脏缺血再灌注损伤中的作用.第一部分:大鼠肝细胞和HSEC的分离、纯化和培养;目的:体外分离、培养大鼠肝细胞和HSEC.方法:采用Ⅳ型胶原酶灌注法分离大鼠肝细胞和非实质细胞,运用Percoll梯度密度离心法分离和纯化HSEC,并利用含肝细胞上清液的RPMI-1 640培养基培养.应用显微镜下形态、电镜和H.E.染色或免疫组化对肝细胞和HSEC作鉴定.第二部分:缺氧预处理对肝细胞缺氧再灌氧损伤的影响;目的:建立缺血预处理体外实验模型,探讨缺氧预处理对原代培养的肝细胞缺氧再灌氧损伤的影响.第三部分:大鼠肝细胞缺氧预处理后基因表达谱的改变;目的:研究缺氧预处理对大鼠肝细胞基因表达谱的影响,分析其在基因水平上的作用机制.第四部分:大鼠肝细胞缺氧预处理后蛋白质分子的二维凝胶电泳和计算机图像分析;目的:寻找缺氧预处理预防肝细胞缺氧再灌氧损伤的相关蛋白质分子,在蛋白质水平上探索该现象的机制.第五部分:肝窦内皮细胞在肝脏缺血预处理中的作用;目的:研究HSEC在肝脏缺血预处理中的作用.小结:IP预防肝脏缺血再灌注损伤的机制十分复杂,可能通过多个途径来实现.肝脏经过IP后,肝组织内腺苷水平上升,通过腺苷A<,2>型受体的兴奋作用使HSEC eNOS mRNA表达增加,产生大量NO,对抗缺血再灌注损伤.另外,预处理后肝细胞内一些与防御功能有关的因子,如 SOD2和IL-10增加,提高了肝脏抗损伤能力,为我们将来找到一些药物在体内较长时间诱导预处理的作用,从而保护肝脏免遭缺血再灌注损伤成为可能.

目录

前言

第一部分大鼠肝细胞和肝窦内皮细胞的分离、纯化和培养

第二部分缺氧预处理对肝细胞缺氧再灌氧损伤的影响

第三部分大鼠肝细胞缺氧预处理后基因表达谱的改变

第四部分大鼠肝细胞缺氧预处理后蛋白质分子的二维凝胶电泳和计算机图像分析

第五部分肝窦内皮细胞在肝脏缺血预处理中的作用

结论

参考文献

综述

致谢

硕士期间发表论文