晚期糖基化终末产物（AGES）通过NF-κB途径影响表皮角质形成细胞功能

摘要

本研究以晚期糖基化终末产物(AGES)为切入点，通过信号转导途径来研究DM状态下表皮角质形成细胞生物学功能的改变。　　方法体内部分：运用STZ诱导晚期DM大鼠模型，每星期测量大鼠的体重、血糖；检测表皮层中NF-κB活性和AGES的表达；检测表皮角质形成细胞释放的表皮生长因子(EGF)；检测试剂盒检测凋亡率的改变；检测表皮角质形成细胞的迁移功能；探讨核转录因子κB(NF-κB)的信号转导途径在DM大鼠表皮角质形成细胞中的活化状态。 体外部分：选用清洁级SD大鼠背部表皮角质形成细胞做细胞原代培养，并使用一定浓度的AGES进行干预，胎盘兰实验检测活细胞贴壁率；通过倒置显微镜观察在不同时相点表皮角质形成细胞的形态学改变；通过透射电镜观察表皮角质形成细胞结构的改变；检验细胞的相对数和相对活力；检测被干预细胞周期的改变；检测被干预细胞凋亡率的变化；检测表皮角质形成细胞对EGF的利用；观察表皮角质形成细胞中NF-κB信号转导途径的活化状态。　　以上体内、体外试验均证实AGES是引起糖尿病状态下表皮角质形成细胞功能异常的主要原因。AGES主要是通过NF-κB途径抑制表皮角质形成细胞对EGF的利用，抑制表皮角质形成细胞的增殖，诱导表皮角质形成细胞进入早期凋亡状态，刺激表皮角质形成细胞迁移；适当抑制NF-κB的活性后，可以部分恢复表皮角质形成细胞的功能。

目录

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引言

第一部分体内试验

材料和方法

第二部分体外试验

材料和方法

一、AGES蛋白的鉴定

二、不同浓度的AGES干预不同的时相点对表皮角质形成细胞生长的影响

三、AGES和葡萄糖联合作用表皮角质形民细胞对其生长的抑制

四、细胞形态学观查

五、表皮角质形成细胞贴壁率计算结果

六、免疫双标实验观察表皮角质形成细胞NF-BR的核转位情况

七、表皮角质形成细胞EGF消耗检测

八、流式细胞学检测表皮角质形成细胞周期改变

九、AnnexinV/P1双染色法检测表皮角质形成细胞凋亡结果

十、表皮角质形成细胞迁移能力的测量

十一、EMSA实验检测NF-B活性变化结果

讨论

结论

参考文献

致谢

已刊文章目录

综述 核因子B与修复细胞间的生物学关系