水通道蛋白1在豚鼠耳蜗形态改变时的表达及其相关因素分析

摘要

水通道蛋白家族成员已在哺乳动物内耳中被广泛定位，但目前关于其功能方面的研究仍是一个弱点。通过前期的实验工作，已经明确水通道蛋白1(AQP1)在哺乳动物内耳中广泛分布，但与其功能相关的研究却尚未见报道。因此，我们首先使用免疫组织化学两种显色方式确定AQP1在豚鼠耳蜗中的分布情况。而后建立豚鼠耳蜗形态改变的三种动物模型(包括耳蜗结构破坏、手术阻塞内淋巴囊引起内淋巴积水以及腹腔注射醛固酮引起内淋巴积水)，对三种动物模型中AQP1的表达情况加以研究。最后对醛固酮作用下豚鼠内淋巴液浓度及耳蜗外侧壁相关基因、蛋白的表达情况加以分析。 目的 1.研究豚鼠耳蜗AQP1的表达情况，明确AQP1在豚鼠耳蜗中的定位分布情况。 2.研究在三种动物模型中AQP1表达的变化情况，探讨AQP1在耳蜗形态改变的情况下的表达情况。 3.研究醛固酮腹腔注射动物离子浓度及耳蜗外侧壁相关基因、蛋白的表达情况，探讨醛固酮在耳蜗中的可能作用机制。 方法 1.使用免疫组织化学DAB染色及免疫荧光技术检测正常豚鼠耳蜗AQP1的表达情况。 2.使用氯仿鼓室注射建立耳蜗结构破坏模型、使用手术阻塞内淋巴囊及腹腔注射醛固酮建立内淋巴积水动物模型。并使用免疫组织化学DAB染色检测在上述三种动物模型中AQP1的表达情况。 3.使用全自动生化分析仪分析醛固酮注射动物模型中血清及内淋巴液中离子浓度；使用RT-PCR及WesternBlot方法检测醛固酮注射早期及后期耳蜗外侧壁Na-KATPase及ENaCmRNA、蛋白表达情况。 结果 1.耳蜗组织中AQP1表达部位主要位于螺旋韧带基底部，Corti's器基底膜及鼓阶内侧上皮面。 2.在耳蜗结构破坏动物模型中，耳蜗AQP1表达随螺旋韧带细胞形态的改变出现先下降后上升的波动过程；手术阻塞内淋巴囊动物模型中，耳蜗AQP1表达未发现明显改变；腹腔注射醛固酮动物模型中，积水侧耳蜗AQP1表达出现下调。 3.醛固酮注射动物模型在早期Na-KATPaseβ1、β3SubunitmRNA水平未发现明显改变，ENaCaSubunitmRNA水平出现上调。后期血清Na+浓度上调，血清及内淋巴液K+浓度出现下调。Na-KATPascα1Subunit蛋白水平出现上调。 结论 1.AQP1在豚鼠耳蜗中可能参与耳蜗外侧壁正常形态的维持。 2.单纯容积改变引起的内淋巴积水可能不会对耳蜗中AQP1在耳蜗的表达发生影响；离子浓度及渗透压改变引起的内淋巴积水可能对AQP1的表达发生影响。 3.醛固酮在耳蜗中可能通过基因组作用方式发挥作用，并通过其对离子浓度及渗透压的作用影响到AQP1的表达而参与耳蜗水代谢。

目录

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英文缩略词表

摘要

前 言

第一部分正常豚鼠耳蜗水通道蛋白1表达及其意义

第二部分豚鼠耳蜗形态改变后AQP1的表达

第三部分醛固酮注射动物模型耳蜗相关因素分析

结论

文献综述

个人简历

致 谢