活血化瘀药物防治增生性玻璃体视网膜病变的实验研究

摘要

目的：通过实验性增生性玻璃体视网膜病变(PVR)动物模型的建立，比较化瘀散结片与该药中的活血化瘀药物防治兔眼PVR的作用机理。方法：体外分离培养兔RPE细胞，采用“玻璃体腔内注入体外培养兔RPE细胞”法建立PVR动物模型。用免疫组织化学法观察化瘀散结片及活血化瘀药物对增生膜中HGF、CTGF表达的影响，并用放射免疫法测定玻璃体液中HA含量的变化。结果：造模后2-3天，玻璃体内出现细尘状混浊，3天后出现不规则细丝状增生条带，随着时间的推移，玻璃体内的增生条带增粗增宽，并向视网膜表面生长，部分兔眼视网膜在15-60天出现视网膜脱离；模型组增生膜HGF、CTGF的表达及HA在玻璃体中的含量明显高于正常组(p＜0.01)；在降低增生膜HGF表达方面，化瘀散结片组与活血化瘀药物组无显著差异(p＞0.05)、在降低CTGF表达及玻璃体HA含量方面，化瘀散结片组优于活血化瘀药物组(p＜0.01)。结论：采用“玻璃体内注入体外培养兔RPE细胞”法建立的实验性PVR动物模型是成功的；HGF、CTGF参与了PVR增生膜的形成；化瘀散结片可能通过降低增生膜内HGF、CTGF的表达、降低HA等ECM的生成，从而抑制PVR增生膜的形成；活血化瘀药物组降低增生膜HGF表达的作用与化瘀散结片组无差异(p＞0.05)，而化瘀散结片组降低CTGF表达和玻璃体HA的作用优于活血化瘀药物组(p＜0.01)，这可能化瘀散结片中除活血化瘀药物外，还与配合软坚散结药物的作用有关。

目录

论文说明：中英文缩略语表

1.引言

1.1现代医学对增生性玻璃体视网膜病变的研究

1.1.1药物治疗

1.1.2给药途径

1.1.3基因治疗

1.2中医学对增生性玻璃体视网膜病变的认识

1.2.1中医古籍中有关本病的记载

1.2.2现代中医学对本病的认识

2.实验一：兔RPE细胞的体外培养

2.1实验材料

2.1.1实验动物

2.1.2试验药品和主要试剂

2.1.3实验仪器

2.2实验方法

2.2.1培养液及试剂配制

2.2.2兔RPE细胞的体外培养及生长情况

2.2.3兔RPE细胞鉴定及其结果

2.3造模用兔RPE细胞制备

3.实验二：活血化瘀药物对实验性增生性玻璃体视网膜病变HGF、CTGF的表达及玻璃体HA含量的影响

3.1实验材料

3.1.1实验动物

3.1.2试验药品

3.1.3实验试剂

3.1.4实验仪器

3.2实验方法

3.2.1分组方法

3.2.2造模方法

3.2.3给药方法

3.2.4标本采集方法

3.3指标观察和检测方法

3.3.1眼底检查方法

3.3.2常规组织病理切片操作和检测方法

3.3.3增生膜HGF表达的检测方法

3.3.4增生膜CTGF表达的检测方法

3.3.5玻璃体内HA含量测定方法

3.4统计方法

3.5实验结果与分析

3.5.1眼底检查结果

3.5.2常规病理切片观察结果

3.5.3活血化瘀药物对实验性PVR动物增生膜截面积(μm2)、截面增生细胞数的影响

3.5.4活血化瘀药物对实验性PVR增生膜HGF表达的影响

3.5.5活血化瘀药物对实验性PVR增生膜CTGF表达的影响

3.5.6活血化瘀药物对实验性PVR动物玻璃体HA的影响

4.讨论

4.1 PVR模型的建立

4.3实验所用药物及检测指标的的选定

4.3.1活血化瘀药物作为治疗组的选定

4.3.2道诺霉素作为阳性药物对照组的选定

4.3.3 HGF、CTGF、HA作为检测指标的选定

4.4活血化瘀药物治疗PVR的机理探讨

4.4.1活血化瘀药物的药理作用

4.4.2活血化瘀药物治疗PVR的作用机理探讨

4.4.3活血化瘀药物能够降低PVR增生膜中HGF的表达

4.4.4活血化瘀药物能够降低PVR增生膜中CTGF的表达

4.4.5活血化瘀药物能够降低PVR玻璃体中HA的含量

结论

问题与展望

致谢

参考文献

附：肝细胞生长因子、结缔组织生长因子与增生性玻璃体视网膜病变(综述)

附图

公开发表的学术论文、专著及科研成臬

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