感毒清口崩片防治呼吸道病毒感染药效及免疫机理研究

摘要

本论文在中医药理论指导下，结合长期临床实践和现代药理研究制成感毒清口崩片。在完成感毒清制剂工艺路线、质量标准及急性毒理学研究的基础上，对其相关主要药效和免疫作用机理进行实验研究。 目的： 观察感毒清对流感病毒FMl致小鼠病毒性肺炎的抗病毒及抗炎、解热、镇痛作用；探讨感毒清对流感病毒FMl致小鼠病毒性肺炎的细胞免疫作用机理，为进一步的临床研究提供理论和实验依据。 方法： 1.以小鼠经鼻吸入流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FMl)复制小鼠病毒性肺炎模型，采用感毒清高、中、低剂量治疗5天，同时设立西药利巴韦林、中药莲花清瘟阳性对照及正常空白对照。观察①死亡保护作用；②肺指数及肺指数抑制率；③肺组织病理形态学改变；④胸腺及脾指数。2.采用2,4-二硝基苯酚致大鼠和内毒素所致家兔发热模型，观察感毒清的体温变化；3.采用二甲苯所致小鼠耳廓肿和胀蛋清所致大鼠足肿胀模型，计算肿胀度及肿胀抑制率；4.采用小鼠热刺激致痛和小鼠化学刺激致痛模型，计算痛阈值；5.采用双抗夹心ELISA法，检测流感病毒感染小鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-10含量；6.采用SABC免疫组织化学法检测流感病毒感染小鼠肺组织石蜡切片中细胞因子TNF-α、ICAM-l、NF-KBP65的表达和脾脏T淋巴细胞亚群的影响。 结果： 1.主要药效研究结果 (1)感染病毒后14d内，小鼠死亡率明显下降，并呈一定量效关系。其中感毒清高、中、低剂量组小鼠死亡率与模型组比较有显著性差异(P<0.001或P<0.05)。 (2)治疗组中感毒清高、中、低剂量组肺指数均显著低于病毒感染对照组(P<0.01)：与利巴韦林对照组比较无明显差异(P>0.05)。(3)①感毒清高、中、低剂量组与病毒感染模型组比较肺部大体病变均有不同程度的减轻；②光镜下感毒清高、中、低剂量组较大改善或减轻较重的间质性肺炎病变，以高剂量组为显著；对各组标本就其病变程度进行半定量分析。结果显示，感毒清治疗组和利巴韦宁治疗组较病毒感染模型组病变明显减轻(P<0.05)。(4)①感毒清高、中、低剂量组及其他各实验组对小鼠感染流感病毒后脾指数无明显影响(P＞0.05)。②感毒清中、低剂量组、莲花清瘟组及利巴韦林组对流感病毒感染小鼠胸腺缩小无明显改善(P＞0.05)；感毒清高剂量组较病毒感染模型组的胸腺指数明显增加(P＜0.05)。(5)①注射内毒素家兔给药后1h～4h感毒清大剂量组兔体温升高受到抑制并下降，与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)。感毒清中剂量组兔体温在2h～3h内用药后体温下降也较空白对照组显著(P＜0.05)：②给予高、中剂量感毒清组的2，4-二硝基苯酚致热大鼠体温明显抑制且迅速消退，其中以中剂量组最为明显。(6)①二甲苯致小鼠耳肿胀程度明显降低，与正常空白组相比有显著性差异(P＜0.05)。②感毒清各剂量组大鼠足趾注射蛋清后30min～90min内脚趾肿胀程度受到明显抑制(P＜0.01，P＜0.05)。以感毒清高剂量组60min最为明显，大鼠足肿胀度明显低于模型对照组(P＜0.001)。(3)①感毒清高剂量组小鼠的热板测定痛阈值明显提高(P＜0.05)。至60min痛阈值则更加明显提高(P＜0.01)。②感毒清高、中剂量组小鼠对O.9％冰醋酸诱发扭体反应次数明显减少，扭体反应抑制率分别为11.63％、6.69％，与正常空白对照组相比，有显著性差异(P＜0.05)。 2．免疫机理研究结果(1)感毒清高、中、低剂量组及阳性药对照利巴韦林组和莲花清瘟组能使小鼠血清IFN-γ含量升高；与病毒感染模型组比较有非常显著性差异(P＜0.01)。(2)感毒清高、中、低剂量组及阳性药对照利巴韦林组和莲花清瘟组能使小鼠血清IL-10含量进一步升高，与病毒感染模型组比较有显著性差异(P＜0.01)。(3)通过图像定量分析，与模型对照组比较，感毒清高剂量组、中剂量组能显著降低FMl感染小鼠肺组织中TNF-α含量，有统计学意义(P＜0.05)：感毒清低剂量组对TNF-α有一定的抑制趋势，但与模型对照组比较无统计学意义(P＞0.05)。(4)模型对照组小鼠肺组织细胞浆及胞核内见分布均匀的大量棕色颗粒，且大多数己进入细胞核。模型组NF-KB P65显著高于空白组(P＜0.01)；感毒清高、中、低剂量组和利巴韦林、莲花清瘟组NF-KB p65的活化程度(棕色颗粒)明显少于模型组(P＜O.01)。(5)病毒感染对照组CD<，4>显著低于正常空白对照组(P＜0.001)，而CD<,8>显著高于正常空白对照组(P＜0.001)，CD<,4>/CD<,8>则明显低于正常空白对照组(P＜0.001)。感毒清高、中、低剂量组及阳性药对照莲花清瘟组则能升高CD<,4>，降低CD<,8>，提高CD<,4>／CD<,8>比值：与病毒感染对照组比较，有统计学意义(P<0,001。利巴韦林明显升高CD4，降低CD<,8>(P<0.01)，但CD<,4>／CD<,8>无明显变化(P>0.05)。 结论:感毒清对流感病毒感染小鼠FMl所致病毒性肺炎有较好的治疗和预防作用。药效学研究表明感毒清有抗病毒、解热、抗炎和镇痛的作用，可减轻肺组织的损伤，改善症状；通过免疫作用机理实验研究，一方面感毒清可提升高T细胞亚群CD4，降低CD8，升高CD4／CD8比值，从而提高细胞免疫应答水平，增强机体抗病毒能力；另一方面可促进IFN-<,γ>、IL-10的分泌，抑制TNF-a、ICAM-1和NF-KB P65，增强疗细胞免疫，抑制疗过度的炎症反应，减轻肺损伤，从而起到免疫调节作用，为中医药治疗与预防呼吸道病毒感染提供新的治法和制剂。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

前言

实验研究第一部分 药效学实验研究

实验研究第二部分 免疫机理实验研究

讨论

结语

问题与展望

参考文献

致谢

综述：中医药防治呼吸道病毒感染的临床与实验研究进展

理论探讨：射干解毒与活血功效探析

综述：黄芪药理与临床研究进展

公开发表的学术论文、专著及科研成果

申明