地榆总皂苷促血小板生成作用及其机理研究

摘要

目的：探讨地榆总皂苷的促血小板生成作用及其对血小板生成起重要调控作用的靶点TPO/c-mpl及SCF/c-kit的影响，以明确地榆总皂苷促血小板生成作用的机理。
　　方法：通过体外及体内实验研究了地榆总皂苷的促血小板生成作用及其机理，体内研究方法：采用环磷酰胺造成小鼠血小板减少症动物模型的方法，于造模的同时给予地榆总皂苷（1，0.5，0.1mg/kg）溶液进行治疗，于造模后第4、7、10天眼丛取血测定小鼠外周血象指标。体外研究方法：①MTT法检测地榆总皂苷对TPO依赖性Baf3/Mpl细胞增殖水平的影响。②CCK8法检测地榆总皂苷对IL-3依赖性Baf3细胞增殖水平的影响。③CCK8法检测地榆总皂苷对IL-3依赖性32D细胞增殖水平的影响。④Giemsa染色法检测地榆总皂苷对32D细胞形态学的影响。⑤RT-PCR法检测地榆总皂苷对Baf3/Mpl细胞中TPO受体mRNA表达水平的影响。⑥RT-PCR法检测地榆总皂苷对32D细胞中c-kit mRNA表达水平的影响。⑦荧光探针法检测地榆总皂苷对HEL细胞中c-kit mRNA表达水平的影响。
　　结果：体内实验结果：地榆总皂苷能显著的升高造模后小鼠的白细胞、红细胞及血小板水平。体外实验结果：①在不含TPO的培养条件下，Baf3/Mpl细胞增殖明显受抑制；在含TPO的培养条件下，Baf3/Mpl细胞增殖明显；当同时加入TPO和质量浓度为10μg/ml的地榆总皂苷后，细胞增殖更为明显，且优于TPO单独处理组；在不含 TPO培养条件下，地榆总皂苷单独处理细胞，也能明显促进细胞增殖。②在不含IL-3的培养条件下，Baf3细胞增殖明显受抑制；在含IL-3的培养条件下，Baf3细胞增殖明显；当同时加入IL-3和质量浓度为10μg/ml的地榆总皂苷后，细胞增殖更为明显，且优于IL-3单独处理组；在不含IL-3培养条件下，地榆总皂苷单独处理细胞，也能明显促进细胞增殖，且呈时间依赖。③在缺乏IL-3培养条件时，细胞增殖明显受抑制，但在含IL-3的培养条件下，32D细胞增殖明显；在不含 IL-3的培养条件下加入质量浓度为10μg/ml的地榆总皂苷后，细胞数量明显增加，并呈时间依赖。④质量浓度为40μg/ml的地榆总皂苷单独处理32D细胞4天后，多倍体巨核细胞数量增加，且胞体变大；当培养时间延长至9天时可明显诱导多倍体巨核细胞数增加，促进巨核细胞成熟分化。⑤质量浓度为10μg/ml的地榆总皂苷单独处理细胞48h能明显上调Baf3/Mpl细胞中TPO受体mRNA的表达水平。⑥质量浓度为10μg/ml的地榆总皂苷单独处理细胞48h能明显上调32D细胞中c-kit mRNA的表达水平。⑦质量浓度为20μg/ml的地榆总皂苷单独处理细胞48h能明显上调HEL细胞中c-kit mRNA的表达水平。
　　结论：地榆总皂苷具有明显的促血小板生成作用，其作用机制与上调 TPO受体及c-kit的表达水平有关。

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英文缩略词表

前言

技术路线图

1 实验材料

1.1 实验动物及细胞株

1.2药物及试剂

1.3 实验动物设施条件

1.4实验仪器

1.5统计学方法

2 方法与结果

2.1地榆总皂苷的制备及含量测定

2.2 地榆总皂苷对环磷酰胺所致血小板减少症的影响

2.3 地榆总皂苷对巨核祖细胞增殖的影响

2.4地榆总皂苷对巨核细胞分化的影响

2.5 地榆总皂苷促血小板生成作用初步机理探索

3 讨论

3.1血小板减少症动物模型

3.2造血干细胞与血小板生成

3.3 造血细胞生长因子与血小板生成

4 结论

4.1 地榆总皂苷对环磷酰胺所致血小板减少症模型小鼠具有

4.2 地榆总皂苷具有促进巨核细胞增殖及分化活性

4.3 地榆总皂苷促血小板生成作用机制与 TPO/Mpl 及SCF/c-kit靶点有关

5 问题与展望

5.1 动物模型的局限性

5.2 地榆总皂苷促血小板生成作用的机制及靶点有待进一步深入

参考文献

致谢

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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