通络糖泰方对GK大鼠糖尿病周围神经病变炎症反应的作用及JNK通路影响的量效关系的机制研究

摘要

目的：本课题通过观察具有养阴清热，活血化痰，通络止痛功效的通络糖泰方对DPN大鼠坐骨神经病理形态、细胞凋亡、神经传导速度、血糖、血清CRP、IL-6、TNF-α水平和Caspase-3蛋白表达以及JNKmRNA,IGF-1mRNA表达的影响，探讨通络糖泰方防治糖尿病周围神经病变的作用机制，为中药防治糖尿病周围神经病变提供理论依据。
　　方法：7-8周龄雄性自发性2型糖尿病GK大鼠70只，适应性饲养一周，测得空腹血糖>11.1mmol/L的56只纳入实验。在连续高脂饲料饲养12周后（其间每周定期测空腹血糖）造成糖尿病周围神经病变模型，将造模成功后的50只GK大鼠，按血糖随机分为模型组10只，通络糖泰高剂量组（简称通高组）10只，通络糖泰中剂量组（简称通中组）10只，通络糖泰低剂量组（简称通低组）10只，二甲双胍+弥可保组（简称西药组）10只。另设年龄、性别与之匹配的wistar大鼠正常组10只，共6组。模型组给予10ml/kg.d生理盐水灌服，通络糖泰高剂量组给予2.88g/kg.d通络糖泰浸膏灌服，通络糖泰中剂量组给予1.44g/kg.d,通络糖泰浸膏灌服，通络糖泰低剂量组给予0.72g/kg.d通络糖泰浸膏灌服，西药组给予二甲双胍片100mg/kg，弥可保片0.2mg/kg配成悬液灌服。实验期间观察DPN大鼠的一般状况、饮水量、体重变化，监测空腹血糖变化；分别在药物干预后的4周,检测DPN大鼠坐骨神经病理形态、细胞凋亡、神经传导速度、血糖、血清CRP、IL-6、TNF-α和Caspase-3蛋白表达以及JNKmRNA,IGF-1mRNA表达的影响。
　　结果:通络糖泰方能够明显缓减DPN大鼠多饮症状、升高体重、降低血糖、血清CRP、IL-6、TNF-α水平、减少神经细胞凋亡、降低Caspase-3蛋白表达，以及降低JNKmRNA表达、升高IGF-1mRNA表达，以通高组的作用最佳。
　　结论：通络糖泰高剂量组能够更好的改善DPN大鼠的一般状态，升高体重，降低血清CRP、IL-6、TNF-α水平，进而减轻血管内皮细胞炎性反应所带来的损伤，保护血管内皮细胞，减轻氧化应激的反应，降低Caspase-3蛋白表达，以及降低JNKmRNA表达、升高IGF-1mRNA表达,改善坐骨神经病理形态学状态。通络糖泰高剂量组保护糖尿病周围神经病变的分子机制可能与下调JNK通路的表达，包括减轻氧化应激，保护血管内皮细胞，从而减轻了周围神经细胞炎症反应的损伤，减少神经细胞凋亡，达到神经保护作用。

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缩略词

引言

实验研究

一、实验材料

1 实验动物

2 饲养环境及饲料供给

3 实验药品

4 主要仪器材料及试剂盒

二、实验方法

1 DPN造模方法及分组方法

2 给药方法

3 标本采集与处理

4 观察指标及检测方法

三、实验结果分析

1 各组大鼠一般情况观察

2 各组大鼠饮水量变化情况

3 各组大鼠体重变化情况

4 各组大鼠血糖变化情况

5 各组大鼠血清CRP水平变化情况

6 各组大鼠血清IL-6 水平变化情况

7 各组大鼠血清TNF-α水平变化情况

8 各组大鼠坐骨神经传导速度的变化情况

9 各组大鼠坐骨神经HE染色观察

10 各组大鼠坐骨神经细胞凋亡数目的比较

11 各组大鼠坐骨神经Caspase-3表达变化情况

12 内参基因β-actin扩增曲线及熔解曲线

13 坐骨神经JNKmRNA RT-PCR扩增曲线及熔解曲线情况

14 坐骨神经JNKmRNA表达水平的变化

15 坐骨神经IGF-1mRNA RT-PCR扩增曲线及熔解曲线情况

16 坐骨神经IGF-1mRNA表达水平的变化

小结

讨论

一、中医对糖尿病周围神经病变的认识及辨证论治

1 病因认识

2 病机认识

3 痰瘀阻络是DPN的基本病理改变

4 中医分型论治

二、 西医对糖尿病周围神经病变的认识及治疗

1 糖尿病周围神经病变的危险因素

2 糖尿病周围神经病变的病理机制

3 综合治疗

三、本实验动物模型评价

1 动物种属的选择

2 T2DM 模型

3 糖尿病周围神经病变的模型制备方法

四、药物选择

1 通络糖泰方立法及组方原理

2 现代药理研究

3 通络糖泰的前期研究成果与思考

4 阳性对照药物的选择

5 实验药物剂量的确定

五、通络糖泰方对 GK 大鼠周围神经病变量效关系的的探讨

1 不同剂量通络糖泰方对糖尿病周围神经病变大鼠一般状态的影响

2 不同剂量通络糖泰方对各组大鼠血糖的影响

3 不同剂量通络糖泰方对各组大鼠坐骨神经传导速度的影响

4 不同剂量通络糖泰方对各组大鼠坐骨神经 HE 染色与细胞凋亡的影响

5 不同剂量通络糖泰对各组大鼠坐骨神经 Caspase-3 表达的影响

6 不同剂量通络糖泰方对各组大鼠坐骨神经IGF-1mRNA表达的影响

六、通络糖泰方对各组大鼠血清炎症因子及坐骨神经JNK通路的影响的机制

1 不同剂量通络糖泰方对各组大鼠血清炎症因子的影响

2 不同剂量通络糖泰方对各组大鼠坐骨神经 JNK 通路的影响

结论

问题与展望

致谢

参考文献

综述:中医药治疗糖尿病周围神经病变研究概况

攻读博士学位期间公开发表的学术论文

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