不同温度艾灸对小鼠穴位局部皮肤朗格汉斯细胞的影响及其与TRPV1的相关性研究

摘要

目的：
　　观察不同温度艾灸对小鼠穴位局部皮肤组织结构及郎格汉斯细胞（Langerhans Cell,LC）形态、分布和数量的影响，同时探讨TRPV1感受装置在艾灸对穴位局部皮肤LC调节中的作用，从局部皮肤免疫的角度探讨艾灸作用的启动机制。
　　方法：
　　健康3月龄 C57BL/6J野生型和TRPV1基因敲除型（TRPV1-/-）小鼠各72只，随机分为野生型空白组、野生型38℃艾灸组、野生型46℃艾灸组、TRPV1-/-空白组、TRPV1-/-38℃艾灸组、TRPV1-/-46℃艾灸组，每组各24只。艾灸组分别采用38℃和46℃艾灸小鼠左侧“足三里”穴30 min，空白组只捆绑不艾灸，分别于艾灸后30 min和72 h取每组中12只小鼠的穴位局部皮肤组织，采用HE染色观察皮肤组织形态的改变，免疫组化法结合免疫荧光法检测穴位局部皮肤CD1a和S100蛋白的表达，研究比较不同温度艾灸对C57BL/6J野生型小鼠和TRPV1-/-小鼠穴区局部皮肤中朗格汉斯细胞形态、分布和数量的影响。
　　结果：
　　1.不同温度艾灸对野生型小鼠穴位皮肤组织形态及LC的影响：艾灸后30 min，野生型38℃艾灸组表皮易剥离，少量炎性细胞浸润，CD1a+和S100+LC胞体较小，散在于表皮及真皮，数量与野生型空白组相比变化均不大（P值均＞0.05）；野生型46℃艾灸组表皮极易剥离，大量炎性细胞浸润，毛囊、皮脂腺异常增生和破坏，CD1a+和S100+LC胞体较大，聚集于毛囊、皮脂腺区域，数量与野生型空白组相比均明显增多（P值均＜0.05）。与艾灸后30 min的野生型38℃艾灸组相比，艾灸后72 h的野生型38℃艾灸组CD1a+和S100+LC数量变化均不大（P值均＞0.05）。与艾灸后30 min的野生型46℃艾灸组相比，艾灸后72 h的野生型46℃艾灸组CD1a+和S100+LC数量均显著减少（P值均＜0.05）。
　　2.不同温度艾灸对TRPV1-/-小鼠穴位皮肤组织形态及LC的影响：艾灸后30 min，与野生型空白组比较，TRPV1-/-空白组可见大量的毛囊和皮脂腺增生；与TRPV1-/-空白组相比，TRPV1-/-38℃艾灸组表皮易剥离，少量炎性细胞浸润，CD1a+和S100+LC胞体较小，散在表皮及真皮，数量变化均不大（P值均＞0.05）；TRPV1-/-46℃艾灸组表皮不完整，大量炎性细胞浸润，毛囊、皮脂腺大量异常增生及破坏，CD1a+和S100+LC胞体较大，聚集在毛囊、皮脂腺区域，数量与TRPV1-/-空白组相比均明显增多（P值均＜0.05）。与艾灸后30 min的TRPV1-/-38℃艾灸组相比，艾灸后72 h的TRPV1-/-38℃艾灸组CD1a+和S100+LC数量变化均不大（P值均＞0.05）。与艾灸后30min的TRPV1-/-46℃艾灸组相比，艾灸后72 h的TRPV1-/-46℃艾灸组CD1a+和S100+LC数量均显著减少（P值均＜0.05）。
　　3.不同种属之间朗格汉斯细胞变化倍数的比较：艾灸后30 min，CD1a+LC数量的变化倍数在野生型46℃艾灸组为（4.05±0.39），大于TRPV1-/-46℃艾灸组（1.32±0.28），差异有统计学意义（P＜0.05）；而S100+LC数量的变化倍数在野生型46℃艾灸组为（3.13±0.36），小于TRPV1-/-46℃艾灸组（4.43±0.13），差异有统计学意义（P＜0.05）。艾灸后72 h,CD1a+LC数量的变化倍数在野生型46℃艾灸组为（0.53±0.05），在TRPV1-/-46℃艾灸组为（0.38±0.06），两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）；S100+LC数量的变化倍数在野生型46℃艾灸组为（0.31±0.01），在TRPV1-/-46℃艾灸组为（0.25±0.03），两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：
　　1．不同温度艾灸对小鼠穴位局部皮肤组织形态结构有影响，且46℃艾灸的影响大于38℃艾灸。
　　2.不同温度艾灸对穴区局部LC的影响不同，表明穴位局部的免疫应答存在温度差异性。
　　3.TRPV1基因敲除后，46℃艾灸对小鼠穴位局部LC的影响仍然存在且与野生型小鼠呈现出相同的变化趋势，只是CD1a+和S100+LC数量变化倍数在不同种属间存在差异，提示艾灸的温热刺激对穴区局部朗格汉斯细胞的影响并不完全依赖于TRPV1。

目录

中英文缩略词表

引言

第一部分不同温度艾灸对C57BL/6J野生型小鼠穴位局部皮肤朗格汉斯细胞的影响研究

1实验材料

2.实验方法

3.实验结果与分析

第二部分不同温度艾灸对TRPV1基因敲除小鼠穴位局部皮肤朗格汉斯细胞的影响研究

1．实验材料

2.实验方法

3.实验结果与分析

第三部分野生型小鼠和TRPV1-/-型小鼠穴位局部皮肤朗格汉斯细胞数量变化倍数

1. LC数量变化倍数的计算

2.数据统计分析

3.实验结果与分析

讨论

1.中医皮部理论与现代皮肤免疫

2.穴位的选择依据-足三里是提高机体免疫力的“要穴”

3.灸温的选择依据

4.艾灸与穴位皮肤局部效应启动的相关机制研究

5. LC

6. TRPV1与艾灸效应启动的相关研究

7. 结果讨论

结论

问题与展望

参考文献

致谢

附件

附件一：综述:针灸调节皮肤局部免疫功能及其机理的研究进展

附件二：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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