环孢素A、他克莫司对上皮细胞灌注后大鼠气管异位移植再上皮化的影响

摘要

目的:
　　 探讨细胞灌注技术在细胞种植中的应用及免疫抑制剂对同种异体大鼠气管异位移植再上皮化的影响。
　　 方法:
　　 SD大鼠气管上皮细胞原代培养，制作细胞悬液(10×106/ml)。Wistar大鼠作为供体，SD大鼠作为受体。免疫抑制剂组：将Wistar大鼠气管上皮细胞消化后制作成裸气管，灌入SD大鼠气管上皮细胞悬液，移植于SD大鼠背部皮下，每日给予环孢素A(CsA)及他克莫司(FK506)处理；非免疫抑制剂组：未予以免疫抑制剂处理，余步骤同免疫抑制剂组；空白对照组：将Wistar大鼠气管灌入生理盐水，移植于SD大鼠背部皮下。分别于移植后5天、10天、20天及30天获取标本，免疫组织化学染色CK14、CK18和CFTR鉴定气道上皮细胞分化，Ki-67鉴定上皮细胞增殖情况；移植后30天的标本行HE染色评价气道上皮的完整性、分化程度、粘膜下炎症细胞浸润和纤维组织增生情况，透射电镜观察细胞的超微结构。
　　 结果:
　　 术后30天标本HE染色结果显示：免疫抑制剂组粘膜上皮完整，气管管腔可见分化良好的纤毛上皮，粘膜下轻度纤维组织增生和炎细胞浸润；非免疫抑制剂组粘膜上皮基本完整，主要为扁平上皮，粘膜下纤维组织增生、炎细胞浸润明显；空白对照组粘膜上皮不明显，纤维组织明显增生，大量炎性细胞浸润，气管官腔堵塞(p=0.023)。免疫组化结果显示：免疫抑制剂组术后晚期气管上皮细胞CK14、CK18和CFTR表达阳性，术后早期Ki-67表达阳性，晚期表达活性降低；非免疫抑制剂组上皮表达以上抗原较弱，荧光免疫未见显示；对照组管腔闭塞，无阳性显示。透射电镜显示免疫抑制剂组可见纤毛上皮结构完整，细胞器形态正常，细胞间连接紧密：非免疫抑制剂组则见较稀疏的扁平上皮细胞，并可见大量的空泡和凋亡的细胞。
　　 结论:
　　 1、体外培养的上皮细胞可以通过灌注技术达到细胞种植的目的，在异系受体鼠体内形成具有较为完整的屏障功能的上皮结构。
　　 2、免疫抑制剂减少炎症反应，有效促进细胞贴壁、增殖及分化，从而有效抑制术后排斥反应，促进移植手术成功。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文缩略语对照表

声明

第1章 SD大鼠气管上皮细胞培养、灌注及气管异位移植模型的建立

1.1 前言

1.2 材料与方法

1.2.1 主要试剂和仪器

1.2.2 上皮细胞培养及细胞悬液制备

1.2.3 裸气管的制作及气管异位移植模型的建立

1.3 结果

1.4 讨论

第2章 环孢素A、他克莫司对上皮细胞灌注后大鼠气管异位移植再上皮化的影响

2.1 前言

2.2 材料与方法

2.2.1 实验动物

2.2.2 实验设备及试剂

2.2.3 实验分组

2.2.4 标本采集

2.2.5 HE染色形态学评价

2.2.6 上皮细胞分化鉴定

2.2.7 上皮细胞增殖定量分析

2.2.8 透射电镜检测

2.2.9 数据处理

2.3 结果

2.3.1 手术时间及效果

2.3.2 形态学(HE染色)结果

2.3.3 上皮细胞分化结果

2.3.4 细胞增殖定量分析结果

2.3.5 透射电镜结果

2.4 讨论

第3章 结论

致谢

参考文献

个人简历 在读期间发表的学术论文与获奖情况

附录A 老年自发性气胸合并肺大泡患者术后并发症的预防

附录B 新辅助化疗肺癌患者长期随访结果分析

附录C 隆突部位的支架设计和植入方法进展