大鼠精子ZP3结合蛋白sp56缺失肽的原核表达、纯化及其抗体的制备

摘要

本研究根据sp561上第三个Shshi结构域设计两条引物，以本实验室已构建的大鼠sp561的cDNA载体为模板PCR扩增出sp56-lost片段，通过pGEX-4T-3上的多克隆酶切位点，把两个sp56-lost片段串联起来定向克隆到pGEX-4T-3载体上。用IPTG诱导原核表达，筛选后，用谷胱甘肽-琼脂糖树脂亲和纯化，得不到可溶目的蛋白。　　本工作成功制备了大鼠sp56s缺失肽(sp56-lost)的抗体，为进一步研究大鼠sp56两种变异体的功能和分布奠定了基础，同时本次实验得到的sp56s缺失肽抗体能为以后精卵结合过程的研究提供一个很好的时空定位标记。

目录

论文说明：答辩委员会签名

摘要

第一部分综述哺乳动物受精过程的研究进展

1.第一步-精卵的种属特异性连结

2.第二步-mZP3,Ca2+,G蛋白和顶体反应

3.第三步-精子穿过卵透明带

4.第四、五步-ADAMS,整合素(integrins)和精卵相互作用

5.第五步-CD9和精卵的融合

6.膜蛋白与生殖免疫

参考文献

第二部分实验

前言

实验一GST-(sp56-lost)2融合蛋白的原核表达及其纯化

实验二Trx-(sp56-lost)2-Hi s融合蛋白的原核表达及其纯化

实验三sp56-lost抗血清的制备

参考文献

致谢

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