上海部分鸟类原虫感染情况调查及种类鉴定

摘要

原虫是寄生于鸟类的常见寄生虫，不仅危害鸟的生长发育，还对人类健康存在潜在威胁。我国感染鸟类的原虫达70种，其中隐孢子虫、弓形虫、阿米巴、芽囊原虫等可感染人类。上海鸟类资源丰富，仅花鸟市场交易的鸟类接近200种，而有关上海鸟类原虫的调查资料却十分有限。本论文拟通过对上海市部分鸟类原虫感染情况及种类的调查，为做好鸟类原虫病的防控和保护鸟类资源提供基础数据。
　　1.上海部分鸟类寄生虫虫卵检查情况
　　为调查上海市部分鸟类寄生虫感染情况，于2012年2、5、8、11月分别从上海市花鸟市场采集部分鸟类粪便，共采集46种鸟的231个粪样，采用漂浮法、沉淀法和麦氏虫卵计数法确定其寄生虫虫卵的感染率及感染强度。结果显示:有39种鸟(84.78％)的171个粪样(74.03％)检出寄生虫虫卵阳性，其中5月、11月的检出率均高于2月、8月，粪便中的寄生虫虫卵以球虫卵囊和线虫虫卵为主。每克粪便中的球虫卵囊数(OPG)或线虫虫卵数(EPG)最大值均出现在11月份，分别为168750个和3375个。结果表明，上海市花鸟市场鸟类感染寄生虫的种类较多、感染率高。检查结果为掌握上海市鸟类寄生虫的感染状况和做好寄生虫病的防控提供了基础数据。
　　2.上海部分鸟类血液原虫感染情况调查及种类鉴定
　　为了解上海市部分鸟类血液原虫的感染现状，于2012年1～12月间，采集上海市部分花鸟市场雀形目、鸡形目、鸽形目共计19种76只鸟类的血液样本，采用镜检与分子检测相结合的方式对鸟类疟原虫和血变虫的感染情况进行调查。结果显示:在鸟类血液样品中，显微镜检出原虫的阳性率只有13.16％(10/76)，而分子检测原虫的检出率达54.05％(40/74);在74只受检鸟中，疟原虫感染率为21.65％(16/74)，血变虫感染率为32.43％(24/74);在灰背鸫血液中鉴定出一鸟类血变虫新种，命名为枢锐血变虫（Haemoproteusshvriin.sp.）。调查结果表明，上海市鸟类感染血液原虫较为普遍，调查结果为上海市鸟类血液原虫病防治提供了一定依据。
　　3.上海部分鸟类隐孢子虫感染情况调查及种类鉴定
　　为了解上海市部分鸟类隐孢子虫的感染情况，对2012年2、5、8、11月采集的38种177个鸟类粪样，通过分子生物学方法检测鸟类隐孢子虫感染情况。结果显示:有9种22个鸟类样品检测出隐孢子虫，平均阳性率为12.43％，其中原鸽的5个样品全部检出阳性;经序列比对，鉴定出3种隐孢子虫，即贝氏隐孢子虫(Cryptosporidiumbailey)、火鸡隐孢子虫（C.meleagridis）、鸡隐孢子虫(C.galli)，鸡隐孢子虫为上海地区首次检出。结果表明，上海市鸟类隐孢子虫的感染率虽不是很高，但存在人畜共患的火鸡隐孢子虫，提示人们在饲养、观赏鸟类时，要切实注意做好相关防范工作。
　　4.上海部分鸟类球虫种类鉴定及环孢子虫调查
　　为了解上海市部分鸟类的球虫种类及环孢子虫的感染情况，从已通过镜检检测为球虫阳性的粪便中筛选13种感染强度较高的鸟类粪便，经培养后对球虫进行形态学观察，最终鉴定为5种球虫，即拉氏艾美耳球虫（Eimerialabbeana）、原鸽艾美耳球虫（Eimeriacolumbarum）、鹎等孢球虫（Isosporapycnonotae）、拉氏等孢子球虫（Isosporalacazei）、噪鹛等孢球虫（Isosporagarrulae），并发现1种疑似环孢子虫的卵囊。而后，对2012年2、5、8、11月采集的38种鸟174个粪样进行分子检测。结果显示:有27种鸟114个粪样的分子检测为球虫阳性，未检出环孢子虫;调查结果为鸟类球虫病的防治提供了科学数据。

目录

摘要

英文缩略表

第一章 文献综述

1．1 球虫

1．1．1 孔雀球虫

1．1．2 鸽球虫

1．1．3 鹤球虫

1．1．4 鹌鹑球虫

1．1．5 麻雀球虫

1．1．6 其他鸟类球虫

1．2 疟原虫

1．3 隐孢子虫

1．3．1 鸽子

1．3．2 鹌鹑

1．3．3 鸵鸟

1．3．4 其他鸟类

1．4 弓形虫

1．5 住白虫

1．6 其他原虫

1．6．1 火鸡组织滴虫

1．6．2 毛滴虫

1．6．3 阿米巴

1．6．4 血变原虫

1．6．5 芽囊原虫

第二章 上海部分鸟类寄生虫虫卵检查情况

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．2．1 样品来源

2．2．2 主要试剂与仪器

2．2．3 检查方法

2．3 结果

2．3．1 鸟类寄生虫虫卵检查情况

2．3．2 四个季度寄生虫虫卵检查结果

2．3．3 鸟类粪便寄生虫虫卵

2．4 讨论

2．4．1 鸟类寄生虫虫卵感染情况

2．4．2 鸟类寄生虫虫卵感染的季节性

第三章 上海部分鸟类血液原虫感染情况调查及种类鉴定

3．1 引言

3．2 材料和方法

3．2．1 实验动物

3．2．2 主要试剂

3．2．3 主要仪器

3．2．4 主要试剂的配制

3．2．5 载玻片和盖玻片的预处理

3．2．6 血涂片的制作、观察及测量

3．2．7 鸟类血液DNA提取

3．2．8 Nested PCR

3．2．9 PCR产物胶回收

3．2．10 回收产物的连接转化

3．2．11 阳性克隆的鉴定及测序

3．2．12 生物信息学分析

3．3 结果

3．3．1 上海部分鸟类血液原虫感染情况

3．3．2 上海部分鸟类血液原虫染虫率

3．3．3 上海部分鸟类血液原虫分子检测结果

3．3．4 鸟类血液原虫cyt b基因序列的生物信息学分析

3．3．5 鸟类血变虫新种鉴定

3．4 讨论

3．4．1 鸟类血液原虫感染情况

3．4．2 鸟类血变虫虫种鉴定及鉴定依据

3．4．3 血变虫新种——枢锐血变虫(Haemoproteus shvrii n．sp．)的鉴定

3．4．4 鸟类疟原虫种类鉴定

第四章 上海部分鸟类隐孢子虫感染情况调查及种类鉴定

4．1 引言

4．2 材料和方法

4．2．1 实验动物

4．2．2 主要试剂

4．2．3 主要仪器

4．2．4 主要试剂的配制

4．2．5 鸟类粪便DNA提取

4．2．6 Nested PCR

4．2．7 PCR产物胶回收

4．2．8 回收产物的连接转化

4．2．9 阳性克隆的鉴定及测序

4．2．10 生物信息学分析

4．3 结果

4．3．1 上海部分鸟类隐孢子虫感染情况

4．3．2 上海部分鸟类隐孢子虫的分子检测结果

4．3．3 上海部分鸟类隐孢子虫18s rDNA基因序列的生物信息学分析

4．4 讨论

4．4．1 鸟类隐孢子虫感染情况

4．4．2 鸟类隐孢子虫感染的季节性

第五章 上海部分鸟类球虫种类鉴定及环孢子虫调查

5．1 引言

5．2 材料和方法

5．2．1 实验动物

5．2．2 主要试剂

5．2．3 主要仪器

5．2．4 主要试剂的配制

5．2．5 球虫种类的鉴定

5．2．6 Nested PCR

5．2．7 酶切PCR产物

5．3 结果

5．3．1 上海部分鸟类球虫的种类鉴定

5．3．2 上海部分鸟类环孢子虫和艾美耳球虫的分子检测结果

5．3．3 上海部分鸟类环孢子虫和艾美耳球虫PCR产物的酶切鉴定结果

5．4 讨论

5．4．1 上海部分鸟类经分子检测球虫感染情况

5．4．2 上海部分鸟类球虫孢子化情况

5．4．3 上海部分鸟类球虫种类鉴定

第六章 全文结论

致谢

参考文献

作者简历

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