弥漫大B细胞淋巴瘤基因表达谱分析及分子分型相关预后研究

摘要

[目的] 弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)具有明显的异质性，病人之间生存情况差异显著。依赖临床参数的国际预后指数不能准确评价预后，从分子水平研究DLBCL生物学特性是揭示疾病本质、正确评估预后的主要途径。本研究拟通过寡核苷酸芯片、免疫组织化学以及单克隆抗体等技术，分析DLBCL基因表达谱，对其进行分子分型并筛选出亚型特异的靶基因；探讨以免疫组织化学为基础的分子分型与预后的关系；制备分子分型靶点CD10单克隆抗体，以供免疫组化使用。 [方法] 采用Affymetrix寡核苷酸芯片检测10例DLBCL的基因表达谱情况，根据71个基因对10例DLBCL进行分子分型，然后利用SAM分析筛选亚型特异的靶基因。采用免疫组织化学方法检测57例DLBCL标本中CD10、Bcl-6和MUM1的表达情况，据此对DLBCL进行分子分型，并结合病人的生存情况分析不同亚型与预后的关系。通过载体构建、蛋白质诱导表达、蛋白质纯化、细胞融合、克隆化等技术，筛选表达抗人CD10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并制备和纯化抗人CD10单克隆抗体。 [结果] 10例进行表达谱分析的DLBCL中，3例为GCB型，6例为ABC型，1例为Type3；筛选出94个亚型特异性靶基因，其中12个基因在ABC型表达上调而在GCB中表达下调，82个基因在GCB型表达上调而在ABC中表达下调。57例DLBCL预后分析结果：GCB型接受CHOP治疗的患者与GCB型接受R-CHOP治疗的患者完全缓解率(CR)、总生存率(OS)和无进展生存率(PFS)均无明显差别(CR: P=1.0000, OS: P=0.2933, PFS: P=0.1681)；GCB型接受CHOP治疗的患者的完全缓解率、总生存率和无进展生存率均明显优于non-GCB型接受CHOP治疗的患者(CR: P=0.0407, OS: P=0.0037, PFS: P=0.0017)；GCB型接受R-CHOP治疗的患者与non-GCB型接受R-CHOP治疗的患者完全缓解率、无进展生存率无明显差别(CR: P=0.3359, PFS: P=0.0891)，而在总生存率上non-GCB型接受R-CHOP治疗的患者较低(OS: P=0.0326)。筛选出两株稳定分泌抗人CD10单克隆抗体的细胞株，制备并纯化出IgG型抗人CD10单克隆抗体。 [结论] 利用基因芯片可以从全基因组水平研究DLBCL的基因表达情况，对DLBCL进行分子分型，其高通量的特点使得从成千上万个基因中筛选具有特殊意义的靶基因成为可能。基于传统的CHOP方案，GCB型的完全缓解率、总生存率和无进展生存率均优于non-GCB型；R-CHOP方案可以提高non-GCB型的完全缓解率，但不提高GCB型的完全缓解率；R-CHOP可能提高non-GCB的生存率。通过单克隆抗体技术可以制备抗人CD10单克隆抗体，其临床实际应用价值尚待鉴定。